X***h
发帖数: 74 | 1 如果我PCR后的product比较干净，能否不处理直接restriction digest? 现在我比较麻
烦的是如
果用column purification总是丢失大部分的DNA，后面digest完了还要gel
purification，
那就所剩无几了。
或者用SAP 去除primers，然后Ethanol-sodium acetate precipitation，总可以上
digestion了吧。 |
l***y
发帖数: 638 | 2 要看用啥酶了
不过pcr又不值钱，多做几管purify，总能拿到足够dna
【在 X***h 的大作中提到】
: 如果我PCR后的product比较干净，能否不处理直接restriction digest? 现在我比较麻
: 烦的是如
: 果用column purification总是丢失大部分的DNA，后面digest完了还要gel
: purification，
: 那就所剩无几了。
: 或者用SAP 去除primers，然后Ethanol-sodium acetate precipitation，总可以上
: digestion了吧。
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X***h
发帖数: 74 | 3 ft，template值钱啊。
用的是SacI HF和HindIII。
【在 l***y 的大作中提到】
: 要看用啥酶了
: 不过pcr又不值钱，多做几管purify，总能拿到足够dna
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s******r
发帖数: 2876 | 4 你既然都P出来了，完全可以用PCR产物第二次扩增一遍，
DNA还不是要多少有多少。
如果我PCR后的product比较干净，能否不处理直接restriction digest? 现在我比较麻
烦的是如
果用column purification总是丢失大部分的DNA，后面digest完了还要gel
purification，
那就所剩无几了。
或者用SAP 去除primers，然后Ethanol-sodium acetate precipitation，总可以上
digestion了吧。
【在 X***h 的大作中提到】
: 如果我PCR后的product比较干净，能否不处理直接restriction digest? 现在我比较麻
: 烦的是如
: 果用column purification总是丢失大部分的DNA，后面digest完了还要gel
: purification，
: 那就所剩无几了。
: 或者用SAP 去除primers，然后Ethanol-sodium acetate precipitation，总可以上
: digestion了吧。
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e****s
发帖数: 1125 | 5 你PCR完了还没有Template?
PCR产物不就是Template了吗？
通常那些PCR clean-up的Kit效率还是不错的，除非你PCR产物超级小或者大。
【在 X***h 的大作中提到】
: ft，template值钱啊。
: 用的是SacI HF和HindIII。
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X***h
发帖数: 74 | 6 实际上是超小。~100bp。
这样的小片段在用column的时候是不是bind完了spin的时间需要短一些呢？我都是照着
标准的流程做
的，结果非常low.
【在 e****s 的大作中提到】
: 你PCR完了还没有Template?
: PCR产物不就是Template了吗？
: 通常那些PCR clean-up的Kit效率还是不错的，除非你PCR产物超级小或者大。
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e****s
发帖数: 1125 | 7 我用ZYMO的Kit弄过80bp的，我只是把2次洗涤，减到一次。效果很好。
关键还是PCR产物多点就好了。
【在 X***h 的大作中提到】
: 实际上是超小。~100bp。
: 这样的小片段在用column的时候是不是bind完了spin的时间需要短一些呢？我都是照着
: 标准的流程做
: 的，结果非常low.
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X***h
发帖数: 74 | 8 恩，我先triple我的PCR，然后再试试一半gel purify，一半ethanol/acetate
precipitation.
【在 e****s 的大作中提到】
: 我用ZYMO的Kit弄过80bp的，我只是把2次洗涤，减到一次。效果很好。
: 关键还是PCR产物多点就好了。
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