z********i
发帖数: 610 | 1 没有接触过virus infection。
转染后24小时换液，24后收virus（2ml)，因为没有超速离心机，所以没法浓缩。测试
的时候用hela，60mmdish +200ulvirus,通过GFP判断infection效率相当高。
然后用1ml/well virus 感染mouse ES cell（6 well)，发现根本没有GFP
pgk promoter，6 ug/ml polybrene
不知道那位大侠能给点意见？
谢了先 |
r******d
发帖数: 24 | 2 病毒制备与浓缩是转染的关键。我一般是用10cm plate转染后12小时换液，48后收
virus（10ml)。浓缩可用clontech. Lentivirus Concentrator。
祝好运。 |
c********o
发帖数: 135 | 3 I heard that mouse ES cells are hard to be infected by lentivirus. |
m*****u
发帖数: 15526 | 4 你等了多长时间看没有？lenti感染表达起来很慢的，4,5天之后才慢慢出来很正常。
【在 z********i 的大作中提到】
: 没有接触过virus infection。
: 转染后24小时换液，24后收virus（2ml)，因为没有超速离心机，所以没法浓缩。测试
: 的时候用hela，60mmdish +200ulvirus,通过GFP判断infection效率相当高。
: 然后用1ml/well virus 感染mouse ES cell（6 well)，发现根本没有GFP
: pgk promoter，6 ug/ml polybrene
: 不知道那位大侠能给点意见？
: 谢了先
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p*****y
发帖数: 44 | 5 测试的时候用hela，60mmdish +200ulvirus,通过GFP判断infection效率相当高。
Check GFP in 2-3 days after infection. The GFP you observed might be GFP
debirs. |
r***e
发帖数: 2539 | 6 1. mouse cells are much more difficult to infect than human cells.
2. pgk promoter is very weak under microscope, check FACS.
【在 z********i 的大作中提到】
: 没有接触过virus infection。
: 转染后24小时换液，24后收virus（2ml)，因为没有超速离心机，所以没法浓缩。测试
: 的时候用hela，60mmdish +200ulvirus,通过GFP判断infection效率相当高。
: 然后用1ml/well virus 感染mouse ES cell（6 well)，发现根本没有GFP
: pgk promoter，6 ug/ml polybrene
: 不知道那位大侠能给点意见？
: 谢了先
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z********i
发帖数: 610 | |
z********i
发帖数: 610 | 8 我一般是两天以后看GFP是否表达。也有四天的。
【在 m*****u 的大作中提到】
: 你等了多长时间看没有？lenti感染表达起来很慢的，4,5天之后才慢慢出来很正常。
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