lentivirus 转染问题求助 - Biology版 - 未名存档

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Biology版 - lentivirus 转染问题求助

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m****p 发帖数: 122	1 最近在做利用lentivirus表达sgRNA KO一个基因，转染第一步就出现问题。针对两个位点病毒是sigma定制的，寄给我的滴度是510^6/ml和110^6/ml，我用它们转了两个细胞（12孔板，每个孔10微升病毒），该病毒正常应该有GFP及puro抗性基因表达的，我在转染24小时和48小时居然没有看到任何荧光。我原来用过santa cruze的shRNA病毒，转染后用puromycin筛选，转染效果还是可以的，最后也筛选出了我要的单克隆细胞。有人遇到过我现在这个情况吗？怎么解决？谢啦
b*****s 发帖数: 169	2 你看看这个promoter是否在该细胞内能有效表达后面的GFP
f******k 发帖数: 856	3 我有点疑惑，你说你拿到的是病毒，怎么还转染（transfection）？你是说转导（ transduction）吗？你的细胞是不是感染效率不高呢？可以尝试spin infection外加用polybrene （4ug/ml )。在我手里用spin infection和polybrene一起的话可以把在B细胞的感染效率提到90% 甚至95%以上。不过我都是自己克隆sgRNA进lentiviral vector，然后转染293细胞做病毒。如果是 sigma做的病毒有问题，你没办法知道。

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