s*******1
发帖数: 188 | 1 addgene上买了zhang feng实验室的lentiCRISPR V2质粒，然后老板从文献上找了两个
sgRNA，克隆进去，做病毒，转染细胞，这些都是常规实验，没有任何问题。
然后老板让我测序看看是否对目的基因的编码序列产生影响。
由于是新手，看的文献也不多，请问大侠们，怎么能够测序分析出sRNA对目的基因的编
码序列的改变呢？
谢谢 |
j****n
发帖数: 3370 | 2 不是太明白？不就是看看有没deletion？
【在 s*******1 的大作中提到】
: addgene上买了zhang feng实验室的lentiCRISPR V2质粒，然后老板从文献上找了两个
: sgRNA，克隆进去，做病毒，转染细胞，这些都是常规实验，没有任何问题。
: 然后老板让我测序看看是否对目的基因的编码序列产生影响。
: 由于是新手，看的文献也不多，请问大侠们，怎么能够测序分析出sRNA对目的基因的编
: 码序列的改变呢？
: 谢谢
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d****u
发帖数: 1553 | 3 第一种方法是你在你目的基因的target位置上下游个几百个bp的地方设计个引物拉PCR
，然后测序这个PCR产物就可以知道你的突变率了。
第二种方法是如果你挑单克隆了的话，直接把上述PCR产物做T载体然后测序 |
s*******1
发帖数: 188 | 4 thank you
PCR
【在 d****u 的大作中提到】
: 第一种方法是你在你目的基因的target位置上下游个几百个bp的地方设计个引物拉PCR
: ，然后测序这个PCR产物就可以知道你的突变率了。
: 第二种方法是如果你挑单克隆了的话，直接把上述PCR产物做T载体然后测序
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