P******m
发帖数: 21 | 1 用带HCV基因组的质粒转染huh7.5细胞，3或14天后收上清，病毒载量很高（1X10~8
copies/ml），但是用这些病毒感染huh7.5细胞（4小时或过夜后洗掉），3天后在上清
里几乎测不到病毒RNA。以前做过类似的实验，没有出现这种问题。请高人指点。 |
c******r
发帖数: 3778 | |
P******m
发帖数: 21 | 3 培养上清提取RNA， 然后real-time PCR测RNA copy |
c******r
发帖数: 3778 | 4 ok，你测的是virus copy，不是infectious unit。八成产生的virus都是死virus，所
以出问题。重来吧
【在 P******m 的大作中提到】
: 培养上清提取RNA， 然后real-time PCR测RNA copy
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P******m
发帖数: 21 | 5 多谢。我测得不是infectious unit,荧光显微镜坏了。
其实我想问的就是问什么这些病毒能分泌到上清里，但是不具感染性？不完全包装？
因为之前是没问题的，这次出问题了。有什么因素会影响其感染性。重新生产病毒时需
要注意什么吗？ |
V*f
发帖数: 171 | 6 Which strain/replicon of HCV did u use? I thought only JFH1 strain can
produce infectious particles, other replicons can not. |
c******r
发帖数: 3778 | 7 病毒浓度太高？
不知道。试验这东西没办法，就只能各种条件试。你过去做这个没问题是吧？看看有什
么条件改变了？
【在 P******m 的大作中提到】
: 多谢。我测得不是infectious unit,荧光显微镜坏了。
: 其实我想问的就是问什么这些病毒能分泌到上清里，但是不具感染性？不完全包装？
: 因为之前是没问题的，这次出问题了。有什么因素会影响其感染性。重新生产病毒时需
: 要注意什么吗？
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a*m
发帖数: 1217 | 8 第2轮感染的时候，有没有可能Huh7.5长的太满了或者传代次数太高？
【在 P******m 的大作中提到】
: 用带HCV基因组的质粒转染huh7.5细胞，3或14天后收上清，病毒载量很高（1X10~8
: copies/ml），但是用这些病毒感染huh7.5细胞（4小时或过夜后洗掉），3天后在上清
: 里几乎测不到病毒RNA。以前做过类似的实验，没有出现这种问题。请高人指点。
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P******m
发帖数: 21 | 9 细胞养了一个多月，大概传了12次。已经在试新的细胞，希望能行。
感染的时候细胞95% confluence，因为要用别的东西刺激，不想因为细胞生长速度差别
造成假象。病毒感染也像转染一样对细胞密度敏感？
【在 a*m 的大作中提到】
: 第2轮感染的时候，有没有可能Huh7.5长的太满了或者传代次数太高？
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a*m
发帖数: 1217 | 10 细胞太密了的话 JFH1感染效率会降低
【在 P******m 的大作中提到】
: 细胞养了一个多月，大概传了12次。已经在试新的细胞，希望能行。
: 感染的时候细胞95% confluence，因为要用别的东西刺激，不想因为细胞生长速度差别
: 造成假象。病毒感染也像转染一样对细胞密度敏感？
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