n****n
发帖数: 610 | 1 我希望纯化Bacteroides里面的galactosidase， 从来没有做过这种实验。看到很多人
都用his-
tag做，我有个问题，加这个his-tag会对酶活性有影响吗？ 有没有可能在E.coli里表
达出来的酶没
有活性？ 如果出现这种情况，有什么其他方法可以解决呢？其他的纯化方法会有区别
吗？
有没有可能我就在Bacteroides里面表达his-tag的酶，然后纯化？
多谢多谢！！ |
s********n
发帖数: 2939 | 2 一般来讲加一个His tag对酶活性影响不大，但可能有个别例子例外。你可以在His tag
和你的蛋白之间加6-10个aa，可以减少对目的蛋白的影响，同时方便纯化。
你可以在所需要的host里表达带His tag的蛋白，前提是你有其遗传系统。但我觉得你
可以先试试E. coli的，毕竟有成熟的表达体系，如果实在不行再试试同源表达。 |
w********r
发帖数: 1431 | 3 你可以在his tag和你的protein之间加一个Thrombin或者某个protease（比如3C）的切
点，
纯化好之后可以把tag切掉。
不过有时候有些蛋白在Ecoli表达很差甚至不溶，可以在his tag之前再放一个Trx帮助
蛋白表达，表达好之后所有的tag都可以再切掉的。
【在 n****n 的大作中提到】
: 我希望纯化Bacteroides里面的galactosidase， 从来没有做过这种实验。看到很多人
: 都用his-
: tag做，我有个问题，加这个his-tag会对酶活性有影响吗？ 有没有可能在E.coli里表
: 达出来的酶没
: 有活性？ 如果出现这种情况，有什么其他方法可以解决呢？其他的纯化方法会有区别
: 吗？
: 有没有可能我就在Bacteroides里面表达his-tag的酶，然后纯化？
: 多谢多谢！！
|
n****n
发帖数: 610 | 4
tag
【在 s********n 的大作中提到】
: 一般来讲加一个His tag对酶活性影响不大，但可能有个别例子例外。你可以在His tag
: 和你的蛋白之间加6-10个aa，可以减少对目的蛋白的影响，同时方便纯化。
: 你可以在所需要的host里表达带His tag的蛋白，前提是你有其遗传系统。但我觉得你
: 可以先试试E. coli的，毕竟有成熟的表达体系，如果实在不行再试试同源表达。
|
n****n
发帖数: 610 | 5 好的 多谢！
tag
【在 s********n 的大作中提到】
: 一般来讲加一个His tag对酶活性影响不大，但可能有个别例子例外。你可以在His tag
: 和你的蛋白之间加6-10个aa，可以减少对目的蛋白的影响，同时方便纯化。
: 你可以在所需要的host里表达带His tag的蛋白，前提是你有其遗传系统。但我觉得你
: 可以先试试E. coli的，毕竟有成熟的表达体系，如果实在不行再试试同源表达。
|
