请问如何提高PCR扩增产物的浓度？ - Biology版 - 未名存档

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Biology版 - 请问如何提高PCR扩增产物的浓度？

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话题: pcr话题: 浓度话题: dna话题: 产物话题: 提高

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I**l 发帖数: 74	1 我要做一些蛋白DNA相互作用的实验，要求DNA终浓度大概在5uM。可是我做完PCR，纯化之后算了一下只有大概0.25uM，差了20倍。请问一般如何可以提高PCR产物浓度？试了提高引物浓度，好像不起效果。。。请指点迷津！
zc 发帖数: 111	2 100ul，100 cycles，taq, primer等都用终极的dose 不用hot lid 最后会浓缩到15ul左右，估计DNA浓度差不多了【在 I**l 的大作中提到】 : 我要做一些蛋白DNA相互作用的实验，要求DNA终浓度大概在5uM。可是我做完PCR，纯 : 化之后算了一下只有大概0.25uM，差了20倍。请问一般如何可以提高PCR产物浓度？试 : 了提高引物浓度，好像不起效果。。。 : 请指点迷津！
c******r 发帖数: 3778	3 pcr一般产物浓度在200nM就是不错的了。主要是PCR的增加是exponential的，在20多cycle的时候多数都已经用光primer和dNTP 了。如果增加primer和dNTP的浓度，要知道，就需要exponentially increase。但是过多的这些东西会抑制Taq的活性，所以一般跑30个cycle就到头了是有道理的。如果实在需要那么大量的DNA，不如把PCR product给clone了，那就想要多少有多少了。【在 I**l 的大作中提到】 : 我要做一些蛋白DNA相互作用的实验，要求DNA终浓度大概在5uM。可是我做完PCR，纯 : 化之后算了一下只有大概0.25uM，差了20倍。请问一般如何可以提高PCR产物浓度？试 : 了提高引物浓度，好像不起效果。。。 : 请指点迷津！

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