m****M
发帖数: 360 | 1 有谁知道什么试剂可以有效的把细胞裂解出的总蛋白固定到９６孔板（任何商业化的９
６孔板或其他任何孔的商业化的都可以）上吗？
试剂去除后固定作用也消失，这样后面加入的蛋白不会被固定。
即，只固定第一步的总蛋白。谢谢 | p****p
发帖数: 3360 | 2 看neuroscience版的回复。
【在 m****M 的大作中提到】
: 有谁知道什么试剂可以有效的把细胞裂解出的总蛋白固定到９６孔板（任何商业化的９
: ６孔板或其他任何孔的商业化的都可以）上吗？
: 试剂去除后固定作用也消失，这样后面加入的蛋白不会被固定。
: 即，只固定第一步的总蛋白。谢谢
| m****M
发帖数: 360 | 3 Thank you, I am reading now.
【在 p****p 的大作中提到】
: 看neuroscience版的回复。
| H****s
发帖数: 301 | 4 (1). Coat your 96 well plate with NeutrAvidin or streptavidin, 1ug/well,
100ul/well. Let sit O/N in the fridge or 1 hour in the 37 degree incubator.
(2). Biotinylate your whole cell protein using Pierce EZ-link biotinylation
kit.
(3). After coating the plate with NeutrAvidin or streptavidin, wash once
with 1XPBS (200ul/well). Block with blocking solution (1%BSA, 1% milk, 200ul
/well). Room temperature, 30 minutes to 1 hour. After blocking step, dump
all blocking solutions.
(4). Then add your biotinylated whole cell protein (100ul/well). Room
temperature, 30-minutes to 1 hour is good enough.
(5). Wash with 1XPBS (200ul/well) to remove unbound whole cell protein.
Proteins added to the wells subsequently will not be fixed to the wells, as
long as they are not biotinylated and they do not bind to any cellular protein.
【在 m****M 的大作中提到】
: 有谁知道什么试剂可以有效的把细胞裂解出的总蛋白固定到９６孔板（任何商业化的９
: ６孔板或其他任何孔的商业化的都可以）上吗？
: 试剂去除后固定作用也消失，这样后面加入的蛋白不会被固定。
: 即，只固定第一步的总蛋白。谢谢
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