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Biology版 - 请教一个GST-Pull down的问题
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话题: gst话题: pull话题: down话题: 载体话题: 阳性
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s*******h
发帖数: 23
1
全长用空载体做对照,阳性
然后去mapping,同样用空载体对照,出现每个结构域都有结合的情况,空载体依旧是
阴性。如何解释?
s*******e
发帖数: 1010
2
空载体指的是GST alone?
p********i
发帖数: 116
3
是不是洗的次数或者强度不够?
s*******h
发帖数: 23
4
空载的确是GST,用TBS+0.1%Triton洗了四次

【在 p********i 的大作中提到】
: 是不是洗的次数或者强度不够?
s*********y
发帖数: 387
5
similar experience to me. I think you may overload the input or your
samples arelack of sufficient washing. Can you think to lower your input
of your final total protein in the IP?
Please keep us updated.

【在 s*******h 的大作中提到】
: 全长用空载体做对照,阳性
: 然后去mapping,同样用空载体对照,出现每个结构域都有结合的情况,空载体依旧是
: 阴性。如何解释?

g********4
发帖数: 4959
6
这种问题都敢问,是PHD (或PHD候选)吗?即使是resin along (没任何bait
protein)也有可能出现阳性信号的问题呢!如果出现这种假阳性,表明你要换系统,
而不是下调in-put,因为理论上讲overload是不可能引进这种系统误差的。
m******5
发帖数: 1383
7
这个回答也太简单化了,关键是lz的系统也没有更好的阳性对照,他可能不知道在他的
系统里真正的信号该是什么样。 也有可能是lz的buffer条件不好,相互作用没做出来
,看见的都是背景?

【在 g********4 的大作中提到】
: 这种问题都敢问,是PHD (或PHD候选)吗?即使是resin along (没任何bait
: protein)也有可能出现阳性信号的问题呢!如果出现这种假阳性,表明你要换系统,
: 而不是下调in-put,因为理论上讲overload是不可能引进这种系统误差的。

s*******e
发帖数: 1010
8
人家不是说了GST alone给出的是negative结果了吗?

【在 g********4 的大作中提到】
: 这种问题都敢问,是PHD (或PHD候选)吗?即使是resin along (没任何bait
: protein)也有可能出现阳性信号的问题呢!如果出现这种假阳性,表明你要换系统,
: 而不是下调in-put,因为理论上讲overload是不可能引进这种系统误差的。

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