t*****z
发帖数: 1598 | 1 图在这里，看不到的点击链接啊：
[img]http://www2.picturepush.com/photo/a/6117040/img/6117040.jpg[/img]
我在琢磨大质粒的降解和构象变化的问题。这是一个大约17kb的质粒，大抽出来的，没有切过。最左边的是ladder，然后从左到右依次是冻在-20度的，藏在4度的和丢在室温的。过了五天拿出来电泳，看看降解得怎么样了。如大家所见，最左边的条带（-20度）看上去挺好，超螺旋和开环的分明。但是中间和右边的已经降解了，在超螺旋条带下面又多出一条细细的但是明显的小条带。请问谁知道这个小条带是怎么回事呢？
多谢啦！ |
v*******a
发帖数: 759 | |
b******n
发帖数: 4225 | 3 denatured plasmid which is resistant to enzymatical digestion
it's due to long time treatment of solution II(NaOH/SDS)
没有切过。最左边的是ladder，然后从左到右依次是冻在-20度的，藏在4度的和丢在室
温的。过了五天拿出来电泳，看看降解得怎么样了。如大家所见，最左边的条带（-20
度）看上去挺好，超螺旋
【在 t*****z 的大作中提到】
: 图在这里，看不到的点击链接啊：
: [img]http://www2.picturepush.com/photo/a/6117040/img/6117040.jpg[/img]
: 我在琢磨大质粒的降解和构象变化的问题。这是一个大约17kb的质粒，大抽出来的，没有切过。最左边的是ladder，然后从左到右依次是冻在-20度的，藏在4度的和丢在室温的。过了五天拿出来电泳，看看降解得怎么样了。如大家所见，最左边的条带（-20度）看上去挺好，超螺旋和开环的分明。但是中间和右边的已经降解了，在超螺旋条带下面又多出一条细细的但是明显的小条带。请问谁知道这个小条带是怎么回事呢？
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t*****z
发帖数: 1598 | 4 是这样啊。可是我刚刚抽提好的质粒，是没有这一条带的，放上几天才出现。是否放置
本身也会让质粒变性呢？
20
【在 b******n 的大作中提到】
: denatured plasmid which is resistant to enzymatical digestion
: it's due to long time treatment of solution II(NaOH/SDS)
:
: 没有切过。最左边的是ladder，然后从左到右依次是冻在-20度的，藏在4度的和丢在室
: 温的。过了五天拿出来电泳，看看降解得怎么样了。如大家所见，最左边的条带（-20
: 度）看上去挺好，超螺旋
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s******y
发帖数: 28562 | 5 会。
至少有两个可能性：
1。完整的双链环状质粒是很稳定的，但是大质粒在提取的时候容易受损，
可能会在其中一条链上有缺口什么的，放在水中就慢慢会被降解。
2。提取的时候蛋白没有去干净，可能有少量核酸酶残留。特别是如果最后的
溶液里没有加EDTA的话就很容易被降解。
【在 t*****z 的大作中提到】
: 是这样啊。可是我刚刚抽提好的质粒，是没有这一条带的，放上几天才出现。是否放置
: 本身也会让质粒变性呢？
:
: 20
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c******r
发帖数: 3778 | 6 明显4度的和室温的发生了降解。细条带是降解产物。应该还有条相应的小分子条带，
可能EB跑出去了，所以看不清楚了。maxi没做干净，还有enzyme的contamination，所
以这个降解是比较特意性的，而不是smear。
室温的降解更明显，full length的已经全部降解，但是那个细条带由于继续水解的速
度远不如从full length降解的速度，所以还比较明显。但是多放几天，这个条带也会
消失。
艳阳天说了，要加EDTA才能防止水解，但是有时候EDTA会影响下面的反应，最好还是-
20度或者-80度保存比较安全方便。
没有切过。最左边的是ladder，然后从左到右依次是冻在-20度的，藏在4度的和丢在室
温的。过了五天拿出来电泳，看看降解得怎么样了。如大家所见，最左边的条带（-20
度）看上去挺好，超螺旋和开环的分明。但是中间和右边的已经降解了，在超螺旋条带
下面又多出一条细细的但是明显的小条带。请问谁知道这个小条带是怎么回事呢？
【在 t*****z 的大作中提到】
: 图在这里，看不到的点击链接啊：
: [img]http://www2.picturepush.com/photo/a/6117040/img/6117040.jpg[/img]
: 我在琢磨大质粒的降解和构象变化的问题。这是一个大约17kb的质粒，大抽出来的，没有切过。最左边的是ladder，然后从左到右依次是冻在-20度的，藏在4度的和丢在室温的。过了五天拿出来电泳，看看降解得怎么样了。如大家所见，最左边的条带（-20度）看上去挺好，超螺旋和开环的分明。但是中间和右边的已经降解了，在超螺旋条带下面又多出一条细细的但是明显的小条带。请问谁知道这个小条带是怎么回事呢？
: 多谢啦！
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