Western 样品煮不煮的问题 - Biology版 - 未名存档

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Biology版 - Western 样品煮不煮的问题

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h*******o 发帖数: 4884	1 以前都是跑胶之前，100度5-7分钟，都没有问题最近好几次都出现样品一煮胶就跑的乱七八糟的现象同样一个样品，没煮的时候跑了一次胶，然出来，条带清晰，western blot出来也干干净净放冰箱里面过了一个over weekend (冰箱没问题），煮了再跑出来，染完胶胶就看上去和火箭电泳一样，有comet尾巴，转的膜做western出来的都不是条带，而是一个一个的 dot 各位大侠知道是怎么回事吗？我怀疑是盐浓度的问题，可是没有理由煮一下盐浓度就变了啊
j**********k 发帖数: 296	2 如果煮得够彻底（95度5min或以上，煮久了记得用cap lock），那就没必要放冰箱， protein不会被degraded，至于posttranslational modifications，test过的种类不多，至少phosphorylation是不会因为放在room temperature而起变化的。这样就可以避免freeze&thaw cycles，操作起来也方便。上去和【在 h*******o 的大作中提到】 : 以前都是跑胶之前，100度5-7分钟，都没有问题 : 最近好几次都出现样品一煮胶就跑的乱七八糟的现象 : 同样一个样品，没煮的时候跑了一次胶，然出来，条带清晰，western blot出来也干干 : 净净 : 放冰箱里面过了一个over weekend (冰箱没问题），煮了再跑出来，染完胶胶就看上去和 : 火箭电泳一样，有comet尾巴，转的膜做western出来的都不是条带，而是一个一个的 : dot : 各位大侠知道是怎么回事吗？我怀疑是盐浓度的问题，可是没有理由煮一下盐浓度就变 : 了啊
w***a 发帖数: 133	3 盐浓度？难道你是开着盖子煮的？如果关紧了煮然后再spin down 浓度应该不会变化的
q******g 发帖数: 3858	4 膜蛋白？

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