W*********n
发帖数: 775 | 1 蛋白样品有俩问题：
1） 蛋白样品在裂解之后就上凝胶电泳分离了，然后储存在4C 在洗脱液（30%甲醇，
10% 醋酸，60%水）。由于仪器室的质谱机器坏了修了一个月，然后那个操作的老师休
假了一个月，我就去做别的，耽搁下来了，现在已经在那里放了7个月了。继续用这个
胶来做，会不会影响实验结果？ （没有任何霉菌之类产生）。
２）当时跑电泳的胶是自己配的，结果配的时候上面的浓缩胶可能是用的丙烯酰胺的浓
度有些大，结果跑出来的胶在浓缩胶里面有一些分子量大的蛋白（只看见一条比较清晰
的条带，其他的基本看不见）， 但是每个样品的蛋白条带还是清晰的。请问，还能不
能用这个胶来做LC/MS/MS? 我一般把每个样品的一条胶切成10片， 然后每片分别处理
来做质谱。
样品比较珍贵，处理也很麻烦；所以如果不影响实验结果，我想继续用它。但是作质谱
的花费也很大，如果样品不用保证出好的结果，我还是想选择去另外准备一份。
谢谢！ |
s******s
发帖数: 13035 | 2 我觉得还行。反正也就1k，样品制备很难的话，try一下花费也不算太多
【在 W*********n 的大作中提到】
: 蛋白样品有俩问题：
: 1） 蛋白样品在裂解之后就上凝胶电泳分离了，然后储存在4C 在洗脱液（30%甲醇，
: 10% 醋酸，60%水）。由于仪器室的质谱机器坏了修了一个月，然后那个操作的老师休
: 假了一个月，我就去做别的，耽搁下来了，现在已经在那里放了7个月了。继续用这个
: 胶来做，会不会影响实验结果？ （没有任何霉菌之类产生）。
: ２）当时跑电泳的胶是自己配的，结果配的时候上面的浓缩胶可能是用的丙烯酰胺的浓
: 度有些大，结果跑出来的胶在浓缩胶里面有一些分子量大的蛋白（只看见一条比较清晰
: 的条带，其他的基本看不见）， 但是每个样品的蛋白条带还是清晰的。请问，还能不
: 能用这个胶来做LC/MS/MS? 我一般把每个样品的一条胶切成10片， 然后每片分别处理
: 来做质谱。
|
W*********n
发帖数: 775 | 3 谢谢回复！
有对照组和实验组，所以花费得2K. 其实样品不是难制备，就是处理起来比较繁琐。再
者，我前面作了两个生物重复了，这是第三次，然后分析，如果这次结果不好，就是鸡
肋，扔不扔的都很头痛。所以我就想知道这个蛋白样品，如果仅仅是上面的2个问题，
是不是对实验结果不产生影响。如果有影响，就重新制备，没有影响，就继续。
【在 s******s 的大作中提到】
: 我觉得还行。反正也就1k，样品制备很难的话，try一下花费也不算太多
|
l**********1
发帖数: 5204 | 4 Re LZ
>当时跑电泳的胶是自己配的，
and
>我还是想选择去另外准备一份
Biorad 梯度胶 在有的代理商那里 批量进货 有打折价的
如能 用下预制的这个, 2D PAGE 后做array LC/MS-MS 才较保险
省了子弹费 现在问炮弹费 2K USD 要不要省的话 是本末倒置的做法
Ps:
just curious
>样品比较珍贵
>现在已经在那里放了7个月了。
LZ Are your kidding us? |
s******s
发帖数: 13035 | 5 一般这种胶不应该老泡着，应该cellulose膜晾干，夹在笔记本里。
想用的时候，用酒精wipe擦擦干净，剪刀剪开，每一小块泡在水里
10min，涨开以后把膜挑掉，送MS
【在 l**********1 的大作中提到】
: Re LZ
: >当时跑电泳的胶是自己配的，
: and
: >我还是想选择去另外准备一份
: Biorad 梯度胶 在有的代理商那里 批量进货 有打折价的
: 如能 用下预制的这个, 2D PAGE 后做array LC/MS-MS 才较保险
: 省了子弹费 现在问炮弹费 2K USD 要不要省的话 是本末倒置的做法
: Ps:
: just curious
: >样品比较珍贵
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W*********n
发帖数: 775 | 6 样品 就是制备麻烦些，所以感觉珍贵。当时作质谱的老师拖了 2个月，我忙别的去了
，都有些淡忘了。现在想想确实不好。
【在 l**********1 的大作中提到】
: Re LZ
: >当时跑电泳的胶是自己配的，
: and
: >我还是想选择去另外准备一份
: Biorad 梯度胶 在有的代理商那里 批量进货 有打折价的
: 如能 用下预制的这个, 2D PAGE 后做array LC/MS-MS 才较保险
: 省了子弹费 现在问炮弹费 2K USD 要不要省的话 是本末倒置的做法
: Ps:
: just curious
: >样品比较珍贵
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W*********n
发帖数: 775 | 7 能解释一下老泡着的坏处吗？一般泡多久拿去试验没有问题？ 还有，短期储存，泡在
洗脱液中好还是水中好？
【在 s******s 的大作中提到】
: 一般这种胶不应该老泡着，应该cellulose膜晾干，夹在笔记本里。
: 想用的时候，用酒精wipe擦擦干净，剪刀剪开，每一小块泡在水里
: 10min，涨开以后把膜挑掉，送MS
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l**********1
发帖数: 5204 | 8 Mark.
【在 s******s 的大作中提到】
: 一般这种胶不应该老泡着，应该cellulose膜晾干，夹在笔记本里。
: 想用的时候，用酒精wipe擦擦干净，剪刀剪开，每一小块泡在水里
: 10min，涨开以后把膜挑掉，送MS
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