n*******l
发帖数: 75 | 1 各位大侠们，我在做用6ohda处理细胞的时候，发现一个蛋白的水平降低，文献表明可
能是proteasome（实验是过表达此蛋白，然后用MG132处理，发现蛋白增多；）或者
caspase降解（在细胞中过表达此蛋白和各种caspase酶,发现蛋白降解）。
我于是用proteasome inhibitor MG132与6OHDA 同时处理，并没有发现此蛋白水平回复
（保证MG132其作用，有阳性对照蛋白）。换用caspase inhibitor和6OHDA处理，也没
有发现次蛋白水平回复，换用lysosome inhibitor和6ohda同时处理，也没有发现次蛋
白水平恢复。
请教别人，说proteasome的inhibitor MG132 并不足以阻止proteasome。说一些好的杂
志都不接受MG132作为proteasome的inhibitor。是这样么、？那有什么好的推荐么？
另外一种可能行是我用药物处理之后，蛋白水平下调，是因为我的蛋白沉淀了，在我的
buffer里面是没有的。但是我是用cell signling公司的buffer20mM Tris， 150mM 氯
化钠，1%triton。收细胞的时候，加入lysis buffer，用细胞刮刮下来，超声后，直接
加入5*的loading buffer，煮样后上样，并没有看到有粘稠的东西啊。有这种可能么？？
多谢多谢啊 |
s******y
发帖数: 28562 | 2 MG132 在10uM 以上对proteasome抑制很明显。有些好的杂志不接受这个作为
单独证据是因为MG132 对很多其他蛋白酶也有抑制作用，所以需要其他证据
一起来confirm. 但是这个并不是你的问题的所在处。
你的情况下，你用6ohda 处理细胞有多久？用MG132又有多久？
另外，你的蛋白并不一定就是降解，有另外几种可能，一个是表达减少，
另外一个是分泌出去了。
【在 n*******l 的大作中提到】
: 各位大侠们，我在做用6ohda处理细胞的时候，发现一个蛋白的水平降低，文献表明可
: 能是proteasome（实验是过表达此蛋白，然后用MG132处理，发现蛋白增多；）或者
: caspase降解（在细胞中过表达此蛋白和各种caspase酶,发现蛋白降解）。
: 我于是用proteasome inhibitor MG132与6OHDA 同时处理，并没有发现此蛋白水平回复
: （保证MG132其作用，有阳性对照蛋白）。换用caspase inhibitor和6OHDA处理，也没
: 有发现次蛋白水平回复，换用lysosome inhibitor和6ohda同时处理，也没有发现次蛋
: 白水平恢复。
: 请教别人，说proteasome的inhibitor MG132 并不足以阻止proteasome。说一些好的杂
: 志都不接受MG132作为proteasome的inhibitor。是这样么、？那有什么好的推荐么？
: 另外一种可能行是我用药物处理之后，蛋白水平下调，是因为我的蛋白沉淀了，在我的
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n*******l
发帖数: 75 | 3 多谢啊，我用6ohda有8个小时，MG132(10uM)也是提前处理半个小时，然后再加入6ohda的啊。
而且我检查过此蛋白的mRNA的水平，是上调的。
另外，如果是翻译水平上减少，这个要怎么证明呢？我的蛋白应该不是分泌性的蛋白啊，没有看到过，你的意思说我应该弄点培养基看看是否有此蛋白呢？还是怎样啊？ |
g*********5
发帖数: 2533 | 4 10uM lactacystin?
MG132 20um？ |
