s********8
发帖数: 619 | 1 用过qiagen,好像回收率挺低的,
我以前喜欢用zymo,但是最近做了几次,有时很好有时不行,不知大家都是用的那个公司
的?
以前在国内用过玻璃奶回收,不知这边哪里可以买到啊? |
S******e
发帖数: 393 | 2 你看是这个吗
Qiagen cat# 20021 |
s********8
发帖数: 619 | 3 好像是啊,还真不知道qiagen就有这个东西.不过这个beads回收的elution体积一般都挺
大的是吧?还是想找一个好用的kit.Zymo 的kit可以elute 在6ul elution buffer里,但
是就是有时候work的不是很好.
【在 S******e 的大作中提到】
: 你看是这个吗
: Qiagen cat# 20021
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S******e
发帖数: 393 | 4 elution体积一般15-25ul吧，我用过，觉得还不错 |
N2
发帖数: 81 | 5 Zymo kit is very reliable. I always use their columns.
How do you do it?
【在 s********8 的大作中提到】
: 好像是啊,还真不知道qiagen就有这个东西.不过这个beads回收的elution体积一般都挺
: 大的是吧?还是想找一个好用的kit.Zymo 的kit可以elute 在6ul elution buffer里,但
: 是就是有时候work的不是很好.
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s******s
发帖数: 13035 | 6 你要体积小，就买Qiagen的MinElute, 10ul体积
【在 s********8 的大作中提到】
: 好像是啊,还真不知道qiagen就有这个东西.不过这个beads回收的elution体积一般都挺
: 大的是吧?还是想找一个好用的kit.Zymo 的kit可以elute 在6ul elution buffer里,但
: 是就是有时候work的不是很好.
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e**e
发帖数: 614 | 7 Fermentas有， K0513 Silica Bead DNA Gel Extraction Kit, 效果挺好 |
s********8
发帖数: 619 | 8 Just follow the protocol.
These columns used to work well for me. Now that I moved to a new lab and
ordered their kits, the miniprep kit works really well, but gel purification
kit has caused problems. Sometimes I have ethanol carryover (that is, the
wash buffer failed to completely pass through the column during the second
spin and ends up coming down when I elute). Some times the yield is low or I
have guanidine carry-over.But when it works, it works really well. Seems to
me some of these columns are deficient.I just don't know which columns are
good and which are not.
I think I'll call them and ask why.
【在 N2 的大作中提到】
: Zymo kit is very reliable. I always use their columns.
: How do you do it?
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s********8
发帖数: 619 | 9 谢谢推荐！
【在 s******s 的大作中提到】
: 你要体积小，就买Qiagen的MinElute, 10ul体积
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s********8
发帖数: 619 | 10 多谢推荐！回头试试这个。
【在 e**e 的大作中提到】
: Fermentas有， K0513 Silica Bead DNA Gel Extraction Kit, 效果挺好
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n***w
发帖数: 2405 | 11 I used pcr clean up and gel purification kit from promega, I felt it's good. |
m******h
发帖数: 32 | 12 How about the efficiency?
I am right now using the kit from Qiagen.
I got about 30-40% yield most of the time.
good.
【在 n***w 的大作中提到】
: I used pcr clean up and gel purification kit from promega, I felt it's good.
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j****x
发帖数: 1704 | 13 很久很久没做胶回收了，但是Qiagen的Qiaquick印象中还是不错的，得率应该在50%的
样子。其实胶回收得率的关键在跑胶而不在kit，各家柱纯化kit的效率基本都在90%以
上，但是很多时候一个样品从上胶到切下来就已经损失了50%甚至更多了。
不过QIAquick有个缺点，就是溶胶buffer的用量是3倍gel slice的体积，稍微大一些的
gel slice就得分好几次离心，这点很不爽，所以后来就换成Fermentas家的GeneJET，1
倍gel slice的体积的溶胶buffer，效率也很好，还便宜。 |
C*******e
发帖数: 4348 | 14 我也是从Qiagen换到Zymo的
还不错啊
【在 s********8 的大作中提到】
: 用过qiagen,好像回收率挺低的,
: 我以前喜欢用zymo,但是最近做了几次,有时很好有时不行,不知大家都是用的那个公司
: 的?
: 以前在国内用过玻璃奶回收,不知这边哪里可以买到啊?
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C*******e
发帖数: 4348 | 15 Fermentas家的GeneJET，记下啦，谢谢推荐！
不过你说的从胶上切下来就损失50%是什么意思呢？
，1
【在 j****x 的大作中提到】
: 很久很久没做胶回收了，但是Qiagen的Qiaquick印象中还是不错的，得率应该在50%的
: 样子。其实胶回收得率的关键在跑胶而不在kit，各家柱纯化kit的效率基本都在90%以
: 上，但是很多时候一个样品从上胶到切下来就已经损失了50%甚至更多了。
: 不过QIAquick有个缺点，就是溶胶buffer的用量是3倍gel slice的体积，稍微大一些的
: gel slice就得分好几次离心，这点很不爽，所以后来就换成Fermentas家的GeneJET，1
: 倍gel slice的体积的溶胶buffer，效率也很好，还便宜。
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s******s
发帖数: 13035 | 16 我qiagen手动有时候也有问题，但是用qiacube同样的kit就没问题。
应该还是条件问题。比如胶没有全溶。不放心的QG两遍，PE两遍，放干
一分钟，加55C预热EB洗脱
s |
s********8
发帖数: 619 | 17 下午给zymo的tech support打了电话,他告诉我说1)ethanol carryover可能是因为我的
离心机速度不够高(这倒是有可能,我们实验室的离心机有够老). 2)guanidine
carryover是很常见的,一般都是因为溶胶的buffer粘在column下面的tip上了.预防的办
法是第一次离心后再把column放到一个新的collection tube里面再转一次.然后再wash
.不过一般的guanidine carryover不影响下游操作. |
