a*******u
发帖数: 19 | 1 A-CFP和B-YFP（或B-CFP&A-YFP）共转HEK293T，COS7，使用lipofectamine 2000转染（
按说明书操作）48小时后，细胞中只有A-CFP或B-YFP，但是没有2个蛋白一起表达的细
胞。A在80 kD左右，B在90kD左右，是不是A和B蛋白太大，两个不容易一起表达？如果
将用A的剪切体约45kD再和B全长去做FRET估计能共表达吗？
Hela里共转Flag-A和His-myc-B的时候A表达很低，所以就没试；293T和COS7中Flag-A和
His-myc-B共转都没问题。 |
o*****r
发帖数: 156 | 2 1. try to mix two plasmid at the very beginning, before lipofectamine;
2. try a different transfection reagent.
【在 a*******u 的大作中提到】
: A-CFP和B-YFP（或B-CFP&A-YFP）共转HEK293T，COS7，使用lipofectamine 2000转染（
: 按说明书操作）48小时后，细胞中只有A-CFP或B-YFP，但是没有2个蛋白一起表达的细
: 胞。A在80 kD左右，B在90kD左右，是不是A和B蛋白太大，两个不容易一起表达？如果
: 将用A的剪切体约45kD再和B全长去做FRET估计能共表达吗？
: Hela里共转Flag-A和His-myc-B的时候A表达很低，所以就没试；293T和COS7中Flag-A和
: His-myc-B共转都没问题。
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S******e
发帖数: 393 | 3 第一条真的有用么？ 我都是一个一个加
【在 o*****r 的大作中提到】
: 1. try to mix two plasmid at the very beginning, before lipofectamine;
: 2. try a different transfection reagent.
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S******e
发帖数: 393 | 4 我的蛋白一个260kD，一个130kD
现在做共转染，搞的我头大
一个表达较高，一个表达很弱 |
S******e
发帖数: 393 | 5 不知你的转化效率多高，
我想效率比较高的的话，一起表达的可能性就大些 |
F*******2
发帖数: 103 | 6 This happens a lot, first make sure your cell isin a healthy condition then
change to another transfection reagent |
a*******u
发帖数: 19 | 7 单个的转化效率也不太高。用的是pECFP-N1和pEYFP-N1，但是空载体的效率很高。
【在 S******e 的大作中提到】
: 不知你的转化效率多高，
: 我想效率比较高的的话，一起表达的可能性就大些
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