g*****d
发帖数: 27 | 1 所有方法都试过了，hot start, redesign primers, touchdown, low primer
concentration, change all the reagents...
昨天试了最后一种方法，design tailed primers, 再不成我就崩溃了
大家有没有好的建议？ | h******8
发帖数: 3778 | | y******8
发帖数: 1764 | 3 Increase your template amount or use a plasmid as positive control.
【在 g*****d 的大作中提到】
: 所有方法都试过了，hot start, redesign primers, touchdown, low primer
: concentration, change all the reagents...
: 昨天试了最后一种方法，design tailed primers, 再不成我就崩溃了
: 大家有没有好的建议？
| g*****d
发帖数: 27 | 4 增加template, 用水做control，用不同的DNA做template都会出现dimers, 没有任何
products. | y******8
发帖数: 1764 | 5 Did you try any control primers?
If not confidential, just paste the sequences of your primers.
Hard to believe that any properly designed primers could fail on plasmid DNA.
【在 g*****d 的大作中提到】
: 增加template, 用水做control，用不同的DNA做template都会出现dimers, 没有任何
: products.
| g*****d
发帖数: 27 | 6 谢谢楼上的，不同的primers都试过了，不同的水也试过了，不同的dNTP
concentration也试过了。用的是bulldog的Taq，都会出现size相同的dimers. 但是奇
怪的是用QPCR的mastermix试过后，出现了不同Size的bands。真是相当奇怪。
sequence在lab的电脑上，周一才能拿到。请楼上的兄弟帮忙分析下，谢谢。 | y******8
发帖数: 1764 | 7 qPCR mastermix里有DMSO.
【在 g*****d 的大作中提到】
: 谢谢楼上的，不同的primers都试过了，不同的水也试过了，不同的dNTP
: concentration也试过了。用的是bulldog的Taq，都会出现size相同的dimers. 但是奇
: 怪的是用QPCR的mastermix试过后，出现了不同Size的bands。真是相当奇怪。
: sequence在lab的电脑上，周一才能拿到。请楼上的兄弟帮忙分析下，谢谢。
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