s******s
发帖数: 699 | 1 要表达GST融合蛋白，第一次转进BL21 codon+（找别人借的...）中，挑菌，摇过夜，
存了一份glycerol stock放在－80, 然后剩下的菌IPTG诱导,成功表达。
可是后来用glycerol stock, 同样的条件，却再也不能诱导表达了，我也从冻在四度的
板子上再挑过菌，还是不能表达。
现在的打算是再找别人借一次（主要是有六个蛋白要表达一老借也不是个事），但还是
觉得很奇怪，菌的抗性还保存着说明质粒应该还在啊，当然这个菌不是保存质粒的好选
择，会有重组，可我还是不敢相信六个样品都发生重组。
有人知道这种第一次可以表达第二次就不行的现象是为什么吗？先谢谢大家了。
下面是抱怨帖：博士后天天在后面追着要蛋白，可是我还有ACE马上要过以及自己的课
题还有别的一堆事，真的没有那么多时间来trouble shooting啊>_< |
m**z
发帖数: 787 | 2 以前实验室一个同学的蛋白就非要用fresh transformed cells. glycerol stock或者
放久了的板子就是不work...
你在借一点BL21,自己做一批competent cell放-80度不行吗？这样就不用每次去借了
【在 s******s 的大作中提到】
: 要表达GST融合蛋白，第一次转进BL21 codon+（找别人借的...）中，挑菌，摇过夜，
: 存了一份glycerol stock放在－80, 然后剩下的菌IPTG诱导,成功表达。
: 可是后来用glycerol stock, 同样的条件，却再也不能诱导表达了，我也从冻在四度的
: 板子上再挑过菌，还是不能表达。
: 现在的打算是再找别人借一次（主要是有六个蛋白要表达一老借也不是个事），但还是
: 觉得很奇怪，菌的抗性还保存着说明质粒应该还在啊，当然这个菌不是保存质粒的好选
: 择，会有重组，可我还是不敢相信六个样品都发生重组。
: 有人知道这种第一次可以表达第二次就不行的现象是为什么吗？先谢谢大家了。
: 下面是抱怨帖：博士后天天在后面追着要蛋白，可是我还有ACE马上要过以及自己的课
: 题还有别的一堆事，真的没有那么多时间来trouble shooting啊>_<
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s******s
发帖数: 699 | 3 谢谢谢谢，看来不是只有我一个人碰到过这个问题。
我要来了这种菌，不过这个codon＋里面自带质粒所以有三种抗性，有两种抗生素我们
没有所以要买（如果只用一种抗生素的话可能回掉质粒），所以先上来问问有没有人知
道为什么会有不表达的情况在决定是借菌还是买抗生素。
实在太谢谢您了～
【在 m**z 的大作中提到】
: 以前实验室一个同学的蛋白就非要用fresh transformed cells. glycerol stock或者
: 放久了的板子就是不work...
: 你在借一点BL21,自己做一批competent cell放-80度不行吗？这样就不用每次去借了
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s********n
发帖数: 2939 | 4 你先确定一下这三种抗性是否都在质粒上，还是有一些在基因组上，如果是在基因组上
的抗性可以不用管，只加质粒上的就可以。
【在 s******s 的大作中提到】
: 谢谢谢谢，看来不是只有我一个人碰到过这个问题。
: 我要来了这种菌，不过这个codon＋里面自带质粒所以有三种抗性，有两种抗生素我们
: 没有所以要买（如果只用一种抗生素的话可能回掉质粒），所以先上来问问有没有人知
: 道为什么会有不表达的情况在决定是借菌还是买抗生素。
: 实在太谢谢您了～
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s********n
发帖数: 2939 | 5 Host strain Genotype
BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL strain E. coli B F– ompT hsdS(rB
– mB–) dcm+ Tetr gal λ(DE3) endA Hte [argU proL Camr] [argU ileY leuW
Strep/Specr]
BL21-CodonPlus-RIL strain3 E. coli B F– ompT hsdS(rB
– mB–) dcm+ Tetr gal endA Hte [argU ileY leuW Camr]
BL21-CodonPlus(DE3)-RIL strain3 E. coli B F– ompT hsdS(rB
– mB–) dcm+ Tetr gal λ(DE3) endA Hte [argU ileY leuW Camr]
BL21-CodonPlus(DE3)-RIL-X strain3 E. coli B F– ompT hsdS(rB
– mB–) dcm+ Tetr gal λ(DE3) endA metA::Tn5(kanr) Hte [argU ileY leuW Camr]
BL21-CodonPlus-RP strain3 E. coli B F– ompT hsdS(rB
– mB–) dcm+ Tetr gal endA Hte [argU proL Camr]
BL21-CodonPlus(DE3)-RP strain3 E. coli B F– ompT hsdS(rB
– mB–) dcm+ Tetr gal λ(DE3) endA Hte [argU proL Camr]
BL21-CodonPlus(DE3)-RP-X strain3 E. coli B F– ompT hsdS(rB
– mB–) dcm+ Tetr gal λ(DE3) endA metA::Tn5(kanr) Hte [argU proL Camr] |
s********n
发帖数: 2939 | 6 没用过这个系列的，不确定是否含质粒，从基因型看好像是插入基因组的(没有pXXX)，
建议你发个Email或者打电话问问Agilent (Stratagene)。 |
s******s
发帖数: 699 | 7 非常感谢，我又看了一下产品介绍，虽说是自带质粒，但只用加一种抗生素就可以了。
“The plasmid contains a functional partitioning locus that ensures
proper plasmid segregation, preventing plasmid loss even in the absence of a
selective agent.”
谢谢提示：）
【在 s********n 的大作中提到】
: 没用过这个系列的，不确定是否含质粒，从基因型看好像是插入基因组的(没有pXXX)，
: 建议你发个Email或者打电话问问Agilent (Stratagene)。
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