I***a
发帖数: 13467 | 1 小鼠组织切片，想做免疫荧光，
那么组织用什么固定对后面的免疫荧光比较好。
谢谢 |
b******s
发帖数: 1089 | 2 现在通常用的固定基本只有PFA和glut两种。
前者是可逆交联，并且在组织内移动速度快。后者铰链度更大，并且不可逆，固定得更
好。但是移动速度更慢。而且对抗体保存不够好。现在一般采用混合固定，4%PFA加0.5
%的glut。
如果是大的组织，先初步固定之后，再slice成小块继续固定。
如果是免疫荧光，glut的浓度应当低于0.5%
【在 I***a 的大作中提到】
: 小鼠组织切片，想做免疫荧光，
: 那么组织用什么固定对后面的免疫荧光比较好。
: 谢谢
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h*****o
发帖数: 342 | 3 加了glutaraldehyde以后再做免疫荧光什么的效果很差啊，很多抗体都用不了了。一般
的情况只要用PFA (4% paraformaldehyde)就差不多了。除非你对细胞结构要求很高，
要看胞内细胞器或者做电镜的，可以加一点glut。我以前试过加0.1% glut,再往上加抗
体就失效了
.5
【在 b******s 的大作中提到】
: 现在通常用的固定基本只有PFA和glut两种。
: 前者是可逆交联，并且在组织内移动速度快。后者铰链度更大，并且不可逆，固定得更
: 好。但是移动速度更慢。而且对抗体保存不够好。现在一般采用混合固定，4%PFA加0.5
: %的glut。
: 如果是大的组织，先初步固定之后，再slice成小块继续固定。
: 如果是免疫荧光，glut的浓度应当低于0.5%
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I***a
发帖数: 13467 | 4 谢谢，
比如老鼠的的肾切一块下来，放到4%PFA加0.5%的glut，然后呢？是不是可以直接送给
别人做组织切片了，
组织切片是送人做的，自己做不了
另外，glut是什么？能给个全称吗？
.5
【在 b******s 的大作中提到】
: 现在通常用的固定基本只有PFA和glut两种。
: 前者是可逆交联，并且在组织内移动速度快。后者铰链度更大，并且不可逆，固定得更
: 好。但是移动速度更慢。而且对抗体保存不够好。现在一般采用混合固定，4%PFA加0.5
: %的glut。
: 如果是大的组织，先初步固定之后，再slice成小块继续固定。
: 如果是免疫荧光，glut的浓度应当低于0.5%
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b******s
发帖数: 1089 | 5 固定组织需要考虑组织大小，否则不能彻底固定。如果组织小于1mm，2hr PFA足够了。
否则需要4度过夜固定。或者先固定2小时，再切成小块固定。
上面有人说0.1%的glut都会影响抗体结合。你可以自己试试，如果是这样的情况，可以
只用4% PFA。
固定完之后，需要dehydration和infiltration，再包埋切片。
glut: glutaraldehyde
PFA: paraformaldehyde
【在 I***a 的大作中提到】
: 谢谢，
: 比如老鼠的的肾切一块下来，放到4%PFA加0.5%的glut，然后呢？是不是可以直接送给
: 别人做组织切片了，
: 组织切片是送人做的，自己做不了
: 另外，glut是什么？能给个全称吗？
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: .5
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Z****9
发帖数: 738 | 6 如果是大的组织，如果开始对老鼠进行活体灌注，效果会好很多 |
n***w
发帖数: 2405 | 7 或者你可以用点formalin之类的固定，比如说PREFER，PERFIX,等等。
然后送去做paraffin section
如果自己做frozen section, 4%PFA 可以了，没必要加glutaraldehyde. |
H****S
发帖数: 40 | 8 4% PFA at 4 degree overnight.次日将tissue多次冲洗后，可以保存在4 degree一段
时间，或者直接切片（我用agar固定，然后自己切，厚度在45 um左右）。多次冲洗后
，切片时残余的PFA不会那么熏眼睛。 |
s******e
发帖数: 370 | 9 glutaraldehyde的auto fluorescence很麻烦啊
我用0.1%固定matrigel都太高，不加的话matrigel又会化掉…… |
