s******y
发帖数: 28562 | 1 我们需要订一些短肽来做抗原，不知道哪个公司的服务既合算又可靠？先谢谢了！ |
h****9
发帖数: 36 | |
c********b
发帖数: 363 | 3 反正我定了一次genscript，价格是便宜，但是完全没法用。我按照别人多家实验室的
剂量增加100倍放到植物里，一点现象都没有，按理是该necrosis的。。。别人都用的
sigma的，我当时就是贪便宜了。
【在 s******y 的大作中提到】
: 我们需要订一些短肽来做抗原，不知道哪个公司的服务既合算又可靠？先谢谢了！
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s******y
发帖数: 28562 | 4 我曾经被Sigma 的化学品部门（包括抗体）害苦过，现在一听到Sigma
就两腿发抖。。。不过据说Sigma的这些合成部门其实是买来的？希望他们
的质量比化学品部门可靠。
【在 c********b 的大作中提到】
: 反正我定了一次genscript，价格是便宜，但是完全没法用。我按照别人多家实验室的
: 剂量增加100倍放到植物里，一点现象都没有，按理是该necrosis的。。。别人都用的
: sigma的，我当时就是贪便宜了。
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k******0
发帖数: 1073 | |
s******y
发帖数: 28562 | 6 那么你会推荐哪个公司呢？
【在 k******0 的大作中提到】
: 搞抗体的公司都会帮合成短肽，一条龙服务。
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d******1
发帖数: 709 | 7 http://www.genesisbio.com.tw/
用过，还行。我们是直接买粗提的，然后自己提纯。 你也还可以买纯化好的。
PS，这家公司发展好快，6年前，还是老板兼小蜜，现在什么都做了。
上海吉尔据说还行，不过我的经验不好。不过他有公斤级别的peptide合成能力。 |
b***l
发帖数: 122 | |
l**********1
发帖数: 5204 | 9 sunny
pls try
CREATIVE DIAGNOSTICS
//www.creative-diagnostics.com/
from
//www.europages.co.uk/CREATIVE-DIAGNOSTICS/bch-EUR-00000003604183-80366001-
29-en/company-information.html
more other dot com pls try
//www.europages.co.uk/business-directory-europe/psrw/antibodies.html |
k****o
发帖数: 589 | |
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e****s
发帖数: 1125 | 11 在Genscript定过。说是我的短肽疏水性太强，合成了很久才给我，但其他都还好。
【在 c********b 的大作中提到】
: 反正我定了一次genscript，价格是便宜，但是完全没法用。我按照别人多家实验室的
: 剂量增加100倍放到植物里，一点现象都没有，按理是该necrosis的。。。别人都用的
: sigma的，我当时就是贪便宜了。
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T**********t
发帖数: 1604 | 12 我们实验室一般用的是Anaspec。以前实验室用过Milipore。不知道哪个好，因为至今
没做出来positive results。。。泪奔。。。 |
n******i
发帖数: 374 | 13
sunnyday, 你好，记得你已经海归南科大，对于多肽药物，我觉得可以找国内公司合成
就行，我研究生就是做多肽合成的，后来在大学和多肽药物公司也工作过，我觉得多肽
的合成技术已经很成熟，国内很多公司都做的很好，比如吉尔生化，深圳瀚宇药业，海
南中和等等，尤其是深圳瀚宇，作为全国唯一的多肽上市公司，他们也做客户肽合成，
客户主要来自欧美。他们公司的袁总裁和客户肽合成头我都很熟悉，呵呵。
据我理解，用于做多肽的抗原，好像纯度达到90或者95以上就行了，我没具体做过，但
是多肽药物纯度则要求高得多，一般都要99%以上纯度。如果不是特别困难的序列，我
觉得问题不大，特别是氨基酸数目小于30一下的。
如果你合成的数量多，我可以帮你先去打听下，看看有优惠么。我曾经也在科大工作过
的。
【在 s******y 的大作中提到】
: 我们需要订一些短肽来做抗原，不知道哪个公司的服务既合算又可靠？先谢谢了！
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p*****m
发帖数: 7030 | 14 你搞错了哈 他在美国AP
【在 n******i 的大作中提到】
:
: sunnyday, 你好，记得你已经海归南科大，对于多肽药物，我觉得可以找国内公司合成
: 就行，我研究生就是做多肽合成的，后来在大学和多肽药物公司也工作过，我觉得多肽
: 的合成技术已经很成熟，国内很多公司都做的很好，比如吉尔生化，深圳瀚宇药业，海
: 南中和等等，尤其是深圳瀚宇，作为全国唯一的多肽上市公司，他们也做客户肽合成，
: 客户主要来自欧美。他们公司的袁总裁和客户肽合成头我都很熟悉，呵呵。
: 据我理解，用于做多肽的抗原，好像纯度达到90或者95以上就行了，我没具体做过，但
: 是多肽药物纯度则要求高得多，一般都要99%以上纯度。如果不是特别困难的序列，我
: 觉得问题不大，特别是氨基酸数目小于30一下的。
: 如果你合成的数量多，我可以帮你先去打听下，看看有优惠么。我曾经也在科大工作过
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n******i
发帖数: 374 | |
b******y
发帖数: 627 | 16 Short peptides may have low immunogenecity. To increase the chance of
getting Ab, you can synthesize a peptide dendrimer from C TERMINUS to N
terminus (as all peptide synthesis is from C to N): as following:
EK(K(K(linker-your peptide)2)2)2.
In this way, you will have a dendrimer that have 2^n of your peptides
presented outwards. This kind of dendrimer has increased immunogenecity and
therefore higher chance to generate Ab.
Anaspec should have this service although a bit expensive.
good luck.
【在 s******y 的大作中提到】
: 我们需要订一些短肽来做抗原，不知道哪个公司的服务既合算又可靠？先谢谢了！
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s******y
发帖数: 28562 | 17 谢谢建议！很有启发！
抗原性不够的问题我们也考虑过，我们本来想的一个替代方法是自己去
表达合成一个peptide-GST-6xHis 这样的蛋白用来做抗原的（如果短肽
不好使的话。不过听起来可能你的方法更好一些。
and
【在 b******y 的大作中提到】
: Short peptides may have low immunogenecity. To increase the chance of
: getting Ab, you can synthesize a peptide dendrimer from C TERMINUS to N
: terminus (as all peptide synthesis is from C to N): as following:
: EK(K(K(linker-your peptide)2)2)2.
: In this way, you will have a dendrimer that have 2^n of your peptides
: presented outwards. This kind of dendrimer has increased immunogenecity and
: therefore higher chance to generate Ab.
: Anaspec should have this service although a bit expensive.
: good luck.
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s******y
发帖数: 28562 | 18 呵呵，的确是搞错了。不过还是很感谢你的回复。
【在 n******i 的大作中提到】
: 我把他和回南科大的Dr Huo 混淆了？
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b******y
发帖数: 627 | 19 GST is 25 KDa and will be more immunogenic than your peptide.
However, you can try GST-peptide-(linker-peptide)n. The bigger n, the lower
yield from E. coli expression. But you probably go to n=5 and still get
substantial protein for mouse injection. |
s******y
发帖数: 28562 | 20 是的，是会有这个问题，不过我们本来是打算用一个空的GST-6Xhis 来预
处理得到的抗血清，把那些和那个peptide 没有关系的东西都清理掉。
不过我就怕万一运气不好，发现把血清处理完之后彻底就没有抗性了
（就是说根本没有抗peptide 的信号）
我们这里还不能直接用(-peptide-)n, 因为我们要求抗体能够识别peptide
N-terminus. 如果用(-peptide-)n 就没有这个性质了。
但是你说的Dentrimer 说不定可以用，因为末端都是暴露的，所以我说不定
会先试试这个。希望不要太贵就好了。呵呵。
lower
【在 b******y 的大作中提到】
: GST is 25 KDa and will be more immunogenic than your peptide.
: However, you can try GST-peptide-(linker-peptide)n. The bigger n, the lower
: yield from E. coli expression. But you probably go to n=5 and still get
: substantial protein for mouse injection.
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b******y
发帖数: 627 | 21 It will be expensive from Anaspec. should try luck with smaller company for
this.
Do you have friends who can help you with this? It is not different from
normal peptide synthesis except that the protection on the two -NH2 on the
first Lysines are the same probably fmoc. You also don't mind a mixture.
There is one more strategy if your peptide doesn't have cys in it.
Synthesize your peptide with an extra cys at the C-terminus. Buy tri-
maleimide from somewhere. Mix your peptide with tri-maleimide with 6:1, i.e.
2 fold in access. You will get a dendrimer of 3 of your peptide presented
outwards. Of course, if you can buy tetra-maleimide, that will be better.
The availability of it might be limited as of two years ago. |
s******y
发帖数: 28562 | 22 这么复杂啊？听得我都要发抖了。。。 不认识能做这个的人。。。
但是正好我要合成的多肽没有lysine, 也没有cycteine
for
e.
【在 b******y 的大作中提到】
: It will be expensive from Anaspec. should try luck with smaller company for
: this.
: Do you have friends who can help you with this? It is not different from
: normal peptide synthesis except that the protection on the two -NH2 on the
: first Lysines are the same probably fmoc. You also don't mind a mixture.
: There is one more strategy if your peptide doesn't have cys in it.
: Synthesize your peptide with an extra cys at the C-terminus. Buy tri-
: maleimide from somewhere. Mix your peptide with tri-maleimide with 6:1, i.e.
: 2 fold in access. You will get a dendrimer of 3 of your peptide presented
: outwards. Of course, if you can buy tetra-maleimide, that will be better.
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b******y
发帖数: 627 | 23 Not complicated for the last strategy. free thiol from cys reacts with
maleimide very efficiently. tri-maleimide is cheap. you have to synthesize
peptide anyway.
Just a reminder: the N-termini of proteins in vivo (bacteria or mammalian
cell) are complicated. The majority of them have the met cleaved upon
translation. Also the majority of them are N-terminally acetylated
cotranslationally or post-translationally.
Be careful! Just want to remind you not to use wrong peptides for Ab
generation. |
s******y
发帖数: 28562 | 24 非常谢谢！ 我们准备订购的合成的多肽末端是有N-acetylation 的（所以不敢在
太小的公司那里订）， 而那个GST fusion万一真的需要做的话也准备在293T cell里面
制备
你知道得很多啊，谢谢。
【在 b******y 的大作中提到】
: Not complicated for the last strategy. free thiol from cys reacts with
: maleimide very efficiently. tri-maleimide is cheap. you have to synthesize
: peptide anyway.
: Just a reminder: the N-termini of proteins in vivo (bacteria or mammalian
: cell) are complicated. The majority of them have the met cleaved upon
: translation. Also the majority of them are N-terminally acetylated
: cotranslationally or post-translationally.
: Be careful! Just want to remind you not to use wrong peptides for Ab
: generation.
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b******y
发帖数: 627 | |
o****e
发帖数: 1011 | 26 多长的peptide？（多少amino acid residue？）
仅是peptide合成的话，所谓"N-Terminal Acetylation"不过是多了一小步简单的
合成而已，还不至于跟“敢不敢”什么的联系起来吧。
mammalian
【在 s******y 的大作中提到】
: 非常谢谢！ 我们准备订购的合成的多肽末端是有N-acetylation 的（所以不敢在
: 太小的公司那里订）， 而那个GST fusion万一真的需要做的话也准备在293T cell里面
: 制备
: 你知道得很多啊，谢谢。
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w********h
发帖数: 12367 | 27 咦,你也做生物了?
【在 o****e 的大作中提到】
: 多长的peptide？（多少amino acid residue？）
: 仅是peptide合成的话，所谓"N-Terminal Acetylation"不过是多了一小步简单的
: 合成而已，还不至于跟“敢不敢”什么的联系起来吧。
:
: mammalian
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s******y
发帖数: 28562 | 28 初步打算弄个15 Aa, 不知道乙酰化到底有多麻烦？因为我们需要这个乙酰化的
纯度非常高，必须用HPLC 和 Mass Spec看起来有95%以上的纯度，不知道一般的
小公司能不能做到那么好。如果你知道哪个公司可以推荐的话能告诉我一下么？ 谢谢
！
【在 o****e 的大作中提到】
: 多长的peptide？（多少amino acid residue？）
: 仅是peptide合成的话，所谓"N-Terminal Acetylation"不过是多了一小步简单的
: 合成而已，还不至于跟“敢不敢”什么的联系起来吧。
:
: mammalian
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i***l
发帖数: 1656 | 29 peptide 2.0
one of my colleague used their service and sounds good
【在 s******y 的大作中提到】
: 初步打算弄个15 Aa, 不知道乙酰化到底有多麻烦？因为我们需要这个乙酰化的
: 纯度非常高，必须用HPLC 和 Mass Spec看起来有95%以上的纯度，不知道一般的
: 小公司能不能做到那么好。如果你知道哪个公司可以推荐的话能告诉我一下么？ 谢谢
: ！
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n******i
发帖数: 374 | 30 乙酰化是非常简单的，最好一步和醋酸酐反应就行，我曾经合成过很多这样多肽。
现在多肽合成技术已很成熟，不是特殊的多肽序列，15个氨基酸难度应该不大。一般小
公司都能够做，你可以先下单让他们做1-2条看看。
95%以上多肽的纯度是很容易得到的，我们以前合成的多肽纯度都是98%以上。 |
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s******y
发帖数: 28562 | 31 这个怎么保证侧链不同时也被乙酰化呢？
【在 n******i 的大作中提到】
: 乙酰化是非常简单的，最好一步和醋酸酐反应就行，我曾经合成过很多这样多肽。
: 现在多肽合成技术已很成熟，不是特殊的多肽序列，15个氨基酸难度应该不大。一般小
: 公司都能够做，你可以先下单让他们做1-2条看看。
: 95%以上多肽的纯度是很容易得到的，我们以前合成的多肽纯度都是98%以上。
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n******i
发帖数: 374 | 32 在乙酰化反应时，只要N-氨基是去保护的，侧链基团都是受到保护的，
当乙酰化完成后，再用TFA强酸裂解侧链保护基团，所以你无需担心这个问题 |
o****e
发帖数: 1011 | 33 （solid phase）peptide synthesis纯粹是化学吧。。。
【在 w********h 的大作中提到】
: 咦,你也做生物了?
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b******y
发帖数: 627 | 34 This is well well-established. like acid + base = H2O for those guys/
machines.
【在 s******y 的大作中提到】
: 这个怎么保证侧链不同时也被乙酰化呢？
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o****e
发帖数: 1011 | 35 乙酰化“很不麻烦”；
我们只买原料，一般自己合成peptide。还没买过外面合成的peptide。
所以没法推荐了。
【在 s******y 的大作中提到】
: 初步打算弄个15 Aa, 不知道乙酰化到底有多麻烦？因为我们需要这个乙酰化的
: 纯度非常高，必须用HPLC 和 Mass Spec看起来有95%以上的纯度，不知道一般的
: 小公司能不能做到那么好。如果你知道哪个公司可以推荐的话能告诉我一下么？ 谢谢
: ！
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s******y
发帖数: 28562 | 36 不好意思，得问一个白痴问题，在C-terminus 加的那个cysteine,
是要C-terminal free acid 形式呢，还是 amide 形式？就是末端那个羧基
的处理是否有讲究？
另外，能不能麻烦你给我贴个连接或者直接和我说说用tri-maleimide
合成dendrimer时候的反应条件？Buffer salt, pH, DTT?, temperature,
time, termination of reaction，等等。
for
e.
【在 b******y 的大作中提到】
: It will be expensive from Anaspec. should try luck with smaller company for
: this.
: Do you have friends who can help you with this? It is not different from
: normal peptide synthesis except that the protection on the two -NH2 on the
: first Lysines are the same probably fmoc. You also don't mind a mixture.
: There is one more strategy if your peptide doesn't have cys in it.
: Synthesize your peptide with an extra cys at the C-terminus. Buy tri-
: maleimide from somewhere. Mix your peptide with tri-maleimide with 6:1, i.e.
: 2 fold in access. You will get a dendrimer of 3 of your peptide presented
: outwards. Of course, if you can buy tetra-maleimide, that will be better.
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o****e
发帖数: 1011 | 37 参加反应的是Cysteine的side chain上的-SH。
（不必担心main chain上的-COOH或-CONH2）
the
i.
presented
.
【在 s******y 的大作中提到】
: 不好意思，得问一个白痴问题，在C-terminus 加的那个cysteine,
: 是要C-terminal free acid 形式呢，还是 amide 形式？就是末端那个羧基
: 的处理是否有讲究？
: 另外，能不能麻烦你给我贴个连接或者直接和我说说用tri-maleimide
: 合成dendrimer时候的反应条件？Buffer salt, pH, DTT?, temperature,
: time, termination of reaction，等等。
:
: for
: e.
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s******y
发帖数: 28562 | 38 那么反应溶液有什么讲究？应该不可以有任何还原剂吧？
要什么温度？pH value? 双方浓度如何？
【在 o****e 的大作中提到】
: 参加反应的是Cysteine的side chain上的-SH。
: （不必担心main chain上的-COOH或-CONH2）
:
: the
: i.
: presented
: .
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b******y
发帖数: 627 | 39 The C-terminus question was answered by onfire.
You are right that reducing agent is prohibited during reaction. However,
DTT or BME can be used to quench the reaction. The manufacture should have a
better protocol. However, neutral pH and room temperature should work. I
will do a small scale reaction, take a few time point, and run SDS-PAGE to
see when the reaction close to finish.
You can purify it using superdex peptide column from GE if needed. Otherwise
, just dialysis into pbs and inject. |
o****e
发帖数: 1011 | 40 我参考的文献的是：
http://mct.aacrjournals.org/content/8/5/1239.short
Synthesis and characterization of a high-affinity αvβ6-specific ligand
for in vitro and in vivo applications
Molecular Cancer Therapeutics
May 2009 8; 1239
【在 s******y 的大作中提到】
: 那么反应溶液有什么讲究？应该不可以有任何还原剂吧？
: 要什么温度？pH value? 双方浓度如何？
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s******y
发帖数: 28562 | 41 非常感谢！
【在 o****e 的大作中提到】
: 我参考的文献的是：
: http://mct.aacrjournals.org/content/8/5/1239.short
: Synthesis and characterization of a high-affinity αvβ6-specific ligand
: for in vitro and in vivo applications
: Molecular Cancer Therapeutics
: May 2009 8; 1239
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