k******0
发帖数: 1073 | 1 近来研究一个g－actin的结合蛋白，但不知有啥功能。哪位能够接受一下g－actin
pool的生理作用吗，即在正常生理情况下，什么因素会促进F－actin解体形成g－actin
？g－actin的含量提高，会影响到细胞蛋白质代谢吗？
谢谢大牛们解答。 |
l**********1
发帖数: 5204 | 2 LZ
title 要改成
'召唤sunnyday 师姐/兄 G-actin和F－actin的转化受什么因素控制的？'
就会马上有答案啦 |
x*****e
发帖数: 309 | 3 Make my day, lol
【在 l**********1 的大作中提到】
: LZ
: title 要改成
: '召唤sunnyday 师姐/兄 G-actin和F－actin的转化受什么因素控制的？'
: 就会马上有答案啦
|
s******y
发帖数: 28562 | 4 你是问体外还是体内情况？
一般而言有这几种情况：
１。离子：Mg2+, ATP, K+ 促进G-actin -> F-actin,
Ca2+, ADP, Na+ 促进F-actin-> G-actin
2. 附属蛋白（按正常情况下的重要性排序）：
（1）切断F-actin 的蛋白： such as gelsolin
(2) 阻断F-actin plus end 的蛋白， such as capping protein
(3) 隔离G-actin，导致有效浓度降低的蛋白，such as thymosin beta-4
你做的那个蛋白有可能类似第（3）种。
G-actin 含量的提高会影响到很多蛋白的代谢，一个最常见的例子就是
serum-response-factor (SRF)，这个蛋白本身是一个transcrption factor,
它能直接感知G-actin的含量（有结合力），调控一些非常重要的基因。
actin
【在 k******0 的大作中提到】
: 近来研究一个g－actin的结合蛋白，但不知有啥功能。哪位能够接受一下g－actin
: pool的生理作用吗，即在正常生理情况下，什么因素会促进F－actin解体形成g－actin
: ？g－actin的含量提高，会影响到细胞蛋白质代谢吗？
: 谢谢大牛们解答。
|
s*****e
发帖数: 1 | 5 怎么能看到细胞内G-actin and F-actin含量的变化？ |
s******y
发帖数: 28562 | 6 很多种方法，比方说有很多试剂是专门染色F-actin 的。
还有一个常用方法就是把细胞裂解了进行高速离心，
F-actin 会沉淀下来。
【在 s*****e 的大作中提到】
: 怎么能看到细胞内G-actin and F-actin含量的变化？
|
k******0
发帖数: 1073 | 7 Sunnyday太赞了，非常谢谢。
如何得到稳定的g－actin？我用LatB获得单体，但好像单体actin不稳定，几天过后就
开始沉淀。可以液氮冻起来吗？
你有没有表达过non－polymerisable mutant actin？用于reconstitute protein
complex。
【在 s******y 的大作中提到】
: 你是问体外还是体内情况？
: 一般而言有这几种情况：
: １。离子：Mg2+, ATP, K+ 促进G-actin -> F-actin,
: Ca2+, ADP, Na+ 促进F-actin-> G-actin
: 2. 附属蛋白（按正常情况下的重要性排序）：
: （1）切断F-actin 的蛋白： such as gelsolin
: (2) 阻断F-actin plus end 的蛋白， such as capping protein
: (3) 隔离G-actin，导致有效浓度降低的蛋白，such as thymosin beta-4
: 你做的那个蛋白有可能类似第（3）种。
: G-actin 含量的提高会影响到很多蛋白的代谢，一个最常见的例子就是
|
s******y
发帖数: 28562 | 8 G-actin 需要保存在G- buffer( Ca+, EDTA, ATP, Na+, DTT)里（你可以去查
google 看配方，否则很容易变性。
加上适量grycerol 之后可以保存在液氮里。
non－polymerisable mutant actin我做过几个版本，一般都很容易变性，
所以保存在液氮里是对的。
【在 k******0 的大作中提到】
: Sunnyday太赞了，非常谢谢。
: 如何得到稳定的g－actin？我用LatB获得单体，但好像单体actin不稳定，几天过后就
: 开始沉淀。可以液氮冻起来吗？
: 你有没有表达过non－polymerisable mutant actin？用于reconstitute protein
: complex。
|
k******0
发帖数: 1073 | 9 非常谢谢指点。
【在 s******y 的大作中提到】
: G-actin 需要保存在G- buffer( Ca+, EDTA, ATP, Na+, DTT)里（你可以去查
: google 看配方，否则很容易变性。
: 加上适量grycerol 之后可以保存在液氮里。
: non－polymerisable mutant actin我做过几个版本，一般都很容易变性，
: 所以保存在液氮里是对的。
|
k******0
发帖数: 1073 | 10 非常谢谢指点。
【在 s******y 的大作中提到】
: G-actin 需要保存在G- buffer( Ca+, EDTA, ATP, Na+, DTT)里（你可以去查
: google 看配方，否则很容易变性。
: 加上适量grycerol 之后可以保存在液氮里。
: non－polymerisable mutant actin我做过几个版本，一般都很容易变性，
: 所以保存在液氮里是对的。
|
k******0
发帖数: 1073 | 11 Sunnyday， 谢谢你的指点。
你是否还有mutant actin的质粒，能否向你要些？
这些mutant actin在E coli中表达如何？
【在 s******y 的大作中提到】
: G-actin 需要保存在G- buffer( Ca+, EDTA, ATP, Na+, DTT)里（你可以去查
: google 看配方，否则很容易变性。
: 加上适量grycerol 之后可以保存在液氮里。
: non－polymerisable mutant actin我做过几个版本，一般都很容易变性，
: 所以保存在液氮里是对的。
|
s******y
发帖数: 28562 | 12 很抱歉我是在研究生院的时候做那些事情的了。后来搬了好几次家之后，
不知道怎么的很多质粒都找不到了。
另外，Actin 在E.coli 中表达后一般都是没有活性的（因为actin折叠需要
一些特殊的chaperon)。
等我有空的时候可能会试试一些新方法，如果能做出来会让你知道的。
【在 k******0 的大作中提到】
: Sunnyday， 谢谢你的指点。
: 你是否还有mutant actin的质粒，能否向你要些？
: 这些mutant actin在E coli中表达如何？
|
