g***s
发帖数: 30 | 1 最近实验室有人在做一个蛋白激酶，这个激酶是和cell adhesion有关，但是不是膜蛋
白，应该只是membrane associated。我们想IP这个蛋白，buffer是1% triton，后来还
加了点SDS。结果每次裂解后，发现离心后上清中蛋白非常少。也尝试过不同的PH，所
以应该也不是等电点沉淀的问题。不知道各位有遇到过类似的问题吗，有什么好的尝试
条件？非常感谢 |
d****u
发帖数: 1553 | 2 你可以试试组份分离，把膜组份整个分离出来，这样蛋白质的相互作用不会被打断，可
能（只是可能啊）能拿到可溶的蛋白质。 |
g***s
发帖数: 30 | 3 你的意思是我的蛋白因为和膜组分结合，所以分离不出来？
【在 d****u 的大作中提到】
: 你可以试试组份分离，把膜组份整个分离出来，这样蛋白质的相互作用不会被打断，可
: 能（只是可能啊）能拿到可溶的蛋白质。
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d****u
发帖数: 1553 | 4 这是一种可能，还有一种可能是你的蛋白和膜上的什么东东结合了才能保持构象稳定。
你把细胞裂解了可能导致了蛋白相互作用的破坏，间接破坏了蛋白的稳定性。
【在 g***s 的大作中提到】
: 你的意思是我的蛋白因为和膜组分结合，所以分离不出来？
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s********x
发帖数: 472 | 5 你的detergent应该可以溶膜了，沉淀主要是细胞骨架。
看看你的蛋白是不是和骨架结合吧。
还有可能是过表达 折叠不好 根本不溶。
看看免疫荧光是不是有聚集。 |
g***s
发帖数: 30 | 6 那对于细胞骨架蛋白的IP实验，有什么特别的要点吗？
【在 s********x 的大作中提到】
: 你的detergent应该可以溶膜了，沉淀主要是细胞骨架。
: 看看你的蛋白是不是和骨架结合吧。
: 还有可能是过表达 折叠不好 根本不溶。
: 看看免疫荧光是不是有聚集。
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