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发信人: niuheliang (别问我是谁), 信区: Military
标 题: CRISPR的高超技巧
发信站: BBS 未名空间站 (Mon Aug 28 15:12:26 2017, 美东)
早饭的时候读了一公众号的推送。差点没把昨晚的剩饭吐出来。难怪生物千老干的是黑
砖窑。原来大名鼎鼎的CRISPR需要如此高超的技巧。
首先的感觉是CRISPR需要瞎蒙。千老完全没有控制。举例说，时间多少不知道。文章说
6小时以上脱靶问题就严重。好吧，脑补一下就分6管从1小时到6小时做6个实验。看哪
一管最后“显示活性”。尼玛难关重复率低。换别人按你的论文说的要等1小时吧。
Good luck。
其次放狗看看啥叫脱靶：
“操作以后留下的序列是非常随机的，根本无法预测会切割在哪里。根据我们实验室的
测序结果来看，CRISPR-CAS处理后靶序列的缺失位置变化非常大，从21bp的巨大缺失，
到根本无变化的都有，实际编辑位点左右偏移可以达到20bp，有的造成frame shift，
有的只缺失1个或几个氨基酸，有的是一个或数个点突变，有的根本没变化。而因为人
类基因有两个拷贝，这两个等位基因不是同时被切割的，有可能只切割一个，另一个还
是原样，也有可能两个都切割了，但位点和产生的序列还各自不同。”
难怪颜mm提到可重复问题。感情是颜mm针对的不是小韩；而是黑砖窑里人所共知的高超
技巧问题。要多高的技巧才能把根本无变化舔成人类的救星。
本班生物博士这么多。谁来给我这民科科普一下？ |
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