m****m
发帖数: 395 | 1 提纯蛋白后老发现14KD附近有条杂带，是不是lysozyme啊？我的蛋白有HISTAG的，难道lysozyme没被洗掉吗？按理lysozyme不应该结合Ni柱啊，难道lysozyme粘住我要的蛋白
了？大家说说有没有这种情况？
而我要的蛋白又恰恰在15KD上面一点，结果这两条带离得很近，很奇怪 |
W*********e
发帖数: 247 | 2 不是你蛋白的降解产物? 另外镍柱的特异性不好, 能拖下来很多杂蛋白
道lysozyme没被洗掉吗？按理lysozyme不应该结合Ni柱啊，难道lysozyme粘住我要的蛋白
【在 m****m 的大作中提到】
: 提纯蛋白后老发现14KD附近有条杂带，是不是lysozyme啊？我的蛋白有HISTAG的，难道lysozyme没被洗掉吗？按理lysozyme不应该结合Ni柱啊，难道lysozyme粘住我要的蛋白
: 了？大家说说有没有这种情况？
: 而我要的蛋白又恰恰在15KD上面一点，结果这两条带离得很近，很奇怪
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a***a
发帖数: 40617 | 3 Ni-NTA下来的就永远不可能一条带
蛋白
【在 W*********e 的大作中提到】
: 不是你蛋白的降解产物? 另外镍柱的特异性不好, 能拖下来很多杂蛋白
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: 道lysozyme没被洗掉吗？按理lysozyme不应该结合Ni柱啊，难道lysozyme粘住我要的蛋白
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a**y
发帖数: 464 | 4 14 kd的杂带在Ni column很常见，35 mM 能洗掉
道lysozyme没被洗掉吗？按理
lysozyme不应该结合Ni柱啊，难道lysozyme粘住我要的蛋白
【在 m****m 的大作中提到】
: 提纯蛋白后老发现14KD附近有条杂带，是不是lysozyme啊？我的蛋白有HISTAG的，难道lysozyme没被洗掉吗？按理lysozyme不应该结合Ni柱啊，难道lysozyme粘住我要的蛋白
: 了？大家说说有没有这种情况？
: 而我要的蛋白又恰恰在15KD上面一点，结果这两条带离得很近，很奇怪
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m****m
发帖数: 395 | 5 NI柱特异性不好，那怎么办呢？
14 kd的杂带在Ni column很常见吗？，我是用35 mM 洗的，但是似乎没有完全洗掉
这么说不是LYSOZYME咯？ |
m****m
发帖数: 395 | |
m****m
发帖数: 395 | 7 降解了吗？不会那么容易降解吧？
蛋白
【在 W*********e 的大作中提到】
: 不是你蛋白的降解产物? 另外镍柱的特异性不好, 能拖下来很多杂蛋白
:
: 道lysozyme没被洗掉吗？按理lysozyme不应该结合Ni柱啊，难道lysozyme粘住我要的蛋白
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b******n
发帖数: 4225 | 8 贴个电泳图上来吧
【在 m****m 的大作中提到】
: 顶啊顶，帖子沉好快
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a*******e
发帖数: 245 | 9 if you add lysozyme in lysis/purification, most probably it is the lysozyme.
道lysozyme没被洗掉吗？按理
lysozyme不应该结合Ni柱啊，难道lysozyme粘住我要的蛋白
【在 m****m 的大作中提到】
: 提纯蛋白后老发现14KD附近有条杂带，是不是lysozyme啊？我的蛋白有HISTAG的，难道lysozyme没被洗掉吗？按理lysozyme不应该结合Ni柱啊，难道lysozyme粘住我要的蛋白
: 了？大家说说有没有这种情况？
: 而我要的蛋白又恰恰在15KD上面一点，结果这两条带离得很近，很奇怪
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m**********2
发帖数: 6568 | 10 there are lots of proteins with multiple His residues. they bind to Ni-NTA.
道lysozyme没被洗掉吗？按理lysozyme不应该结合Ni柱啊，难道lysozyme粘住我要的蛋白
【在 m****m 的大作中提到】
: 提纯蛋白后老发现14KD附近有条杂带，是不是lysozyme啊？我的蛋白有HISTAG的，难道lysozyme没被洗掉吗？按理lysozyme不应该结合Ni柱啊，难道lysozyme粘住我要的蛋白
: 了？大家说说有没有这种情况？
: 而我要的蛋白又恰恰在15KD上面一点，结果这两条带离得很近，很奇怪
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W*****o
发帖数: 1780 | 11 I have same trouble before. After I removed lysome, only sonicate, then this
14 kD band disappeared. |
a*******e
发帖数: 245 | 12 make sense. because that band is lysozyme, if supplemented with lysozyme in
lysis.
Some people even get crystals, but later on it proved to be lysozyme crystal.
this
【在 W*****o 的大作中提到】
: I have same trouble before. After I removed lysome, only sonicate, then this
: 14 kD band disappeared.
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K*F
发帖数: 120 | |
b******n
发帖数: 4225 | 14 能说说Cobalt柱的好处么？
【在 K*F 的大作中提到】
: 用Cobalt柱！
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k********u
发帖数: 2209 | 15 有些杂带bind Ni，但不bind Cobalt，亲身体会。。。
可以考虑尝试。个人的使用感受，cobalt特异性高一点，但是binding的affinity
没有NiNTA高。
【在 b******n 的大作中提到】
: 能说说Cobalt柱的好处么？
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