h****k
发帖数: 182 | 1 大家有什么好方法节省一抗的使用吗？实在是太贵了。 |
h*******o
发帖数: 4884 | 2 Re-use
Use Casein or Pierce Superblock to dilute antibody, so it can be re-used and
stored at 4oC for longer time without precipitation
Also, use signal enhancer |
w******e
发帖数: 1187 | 3 what kind of signal enhancer are you referring to? thx!
and
【在 h*******o 的大作中提到】
: Re-use
: Use Casein or Pierce Superblock to dilute antibody, so it can be re-used and
: stored at 4oC for longer time without precipitation
: Also, use signal enhancer
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p******i
发帖数: 1092 | 4 如果一抗在MILK裡，裝到FALCON管子裡 -20
如果一抗在BSA裡，裝到FALCON管子裡，4度（可以加點sodium azide）
【在 h****k 的大作中提到】
: 大家有什么好方法节省一抗的使用吗？实在是太贵了。
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x****u
发帖数: 530 | 5 NaN3可以保存好几个月
【在 h****k 的大作中提到】
: 大家有什么好方法节省一抗的使用吗？实在是太贵了。
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c*******y
发帖数: 1657 | |
R*****w
发帖数: 447 | 7 1. 重复使用
2. 用小塑料袋，一块普通的WB只需3－4ml，4C O/N |
f*********r
发帖数: 1233 | 8 除了上面说的，加一条。
可以根据目标条带的分子量，把整张膜剪成多个横条。把横条放在大小刚刚合适的容器
里，比如放盖玻片的盒子里。这样抗体用量可以缩小到2毫升以内。
回收的时候，用pipette仔细吸干净。
按1：1000的比例稀释，每次只须2微升抗体。这个1：1000的抗体，至少可以用5次。1
瓶100微升的抗体，一共可以250次WB。 |
Z******5
发帖数: 435 | 9 首先，要找个大小合适的孵育器皿，这个对节省抗体很关键。 我比较喜欢用那种细长
的50ml的flask，把上层剪掉做孵育器皿，孵育整张膜也就用6~7ml抗体/milk。每次孵
育后，取出膜，用保鲜膜包住flask，直接冻到-20，下次拿出来融化后继续用。
【在 h****k 的大作中提到】
: 大家有什么好方法节省一抗的使用吗？实在是太贵了。
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a*****g
发帖数: 543 | 10 before this, please use enough antibody to cover the whole blot to make sur
e there is no other interesting/relevant bands...
1
【在 f*********r 的大作中提到】
: 除了上面说的，加一条。
: 可以根据目标条带的分子量，把整张膜剪成多个横条。把横条放在大小刚刚合适的容器
: 里，比如放盖玻片的盒子里。这样抗体用量可以缩小到2毫升以内。
: 回收的时候，用pipette仔细吸干净。
: 按1：1000的比例稀释，每次只须2微升抗体。这个1：1000的抗体，至少可以用5次。1
: 瓶100微升的抗体，一共可以250次WB。
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m*****u
发帖数: 15526 | 11 你用过加了NaN3的抗体么？有网页不推荐用NaN3保存抗体，说对ECL显色系统有破坏作用
【在 p******i 的大作中提到】
: 如果一抗在MILK裡，裝到FALCON管子裡 -20
: 如果一抗在BSA裡，裝到FALCON管子裡，4度（可以加點sodium azide）
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v***a
发帖数: 1242 | 12 我们实验室把一抗加了sodium azide后通常用很久
最近我还拿了2001年某人配的一个一抗（保存在4度的）来用了
信号很强
【在 x****u 的大作中提到】
: NaN3可以保存好几个月
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h*******o
发帖数: 4884 | 13 NaN3 does interfere with HRP conjugated 2nd secondary antibody.
But it is in primary antibody, with enough washing between primary and 2nd
antibody, it should be OK.
I don't recommend use antibody older than 3 months in diluted solutions, who
knows what could happen. Especially when your samples are precious, I would
rather use something that's safe and predictable.
By the way, antibodies are not expensive at all if they actually work.
I would rather spend more money on a reliable vendor than waste my time
trying cheap crappy ones.
作用
【在 m*****u 的大作中提到】
: 你用过加了NaN3的抗体么？有网页不推荐用NaN3保存抗体，说对ECL显色系统有破坏作用
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