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Biology版 - 【发包子】请ELISA高手进
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x*****a
发帖数: 972
1
最近被一个ELISA kit给搞郁闷了。RnD System公司的产品。我要测cell media中的
endothelin-1的含量。现在的问题是——standard老是做的很烂。我也不知道哪里出了
问题。我前后用了两个Kit，第一个Kit的standard没问题，但是第二个（我用这个做了2批）怎么做
standard都不行。
附件中是manual中给出的样品。把浓度取log10做X轴；Luminescence取log10做Y轴，应
该是线性。我做的线性非常差，而且低浓度的standard的deviation很大（duplicate）
1）会不会是第二个Kit的antibody公司coat的不好？或者质量有问题？
2）log后才线性，那这个kit是不是本身就很容易出问题？Assay Design有个Kit，是直
接用原始数据划线，就是线性。这个会不会更精准一点？我一直不喜欢4 parameter或者其他方式
处理原始数据后才线性的kit。
3）最后一步incubation（产生luminescence的步骤），manual上说要Incubate 5-20分钟，而
且说了，这15分钟内，lum的强度会发生变化。我在这15分钟内读了3次（每次只要2分钟），结果差别
很大。我都不知道该信哪个了。Assay Design那个最后一步会加个stopping agent终止反应。我
想了下，我以前做的ELISA好像也要加stopping agent的。这种luminescence的是不是不如
optical density（Assay Design的就是OD）好？
谢谢了啊
t******n
发帖数: 354
2
Not a Gaoshou
just several comments:
use triplicate for the standard curve
there is one software for calculation of the standard curve and sample
concentration.
For TMB OD test, you need add the stop solution in the kit. it is in blue at
first and then it will change into yellow after adding stop buffer.

了2批）怎么做
或者其他方式

【在 x*****a 的大作中提到】
: 最近被一个ELISA kit给搞郁闷了。RnD System公司的产品。我要测cell media中的
: endothelin-1的含量。现在的问题是——standard老是做的很烂。我也不知道哪里出了
: 问题。我前后用了两个Kit，第一个Kit的standard没问题，但是第二个（我用这个做了2批）怎么做
: standard都不行。
: 附件中是manual中给出的样品。把浓度取log10做X轴；Luminescence取log10做Y轴，应
: 该是线性。我做的线性非常差，而且低浓度的standard的deviation很大（duplicate）
: 1）会不会是第二个Kit的antibody公司coat的不好？或者质量有问题？
: 2）log后才线性，那这个kit是不是本身就很容易出问题？Assay Design有个Kit，是直
: 接用原始数据划线，就是线性。这个会不会更精准一点？我一直不喜欢4 parameter或者其他方式
: 处理原始数据后才线性的kit。
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