C*******e
发帖数: 4348 | 1 因为手上的蛋白有high pI (>10)
准备用离子交换柱作为第一步粗提
就是直接lysate 9kg离心后上柱子
看了看GE的网站
CM sepharose fast flow resin,weak cation
SP sepharose fast flow resin,strong cation
好像都可以用
不过看起来都是要和FPLC一起用的
想问问看有没有人知道如果用普通gravity column行不行?
pack的时候有没有要注意的?
哦,还有个问题是我应该选CM还是SP? |
e****s
发帖数: 1125 | 2 Fast Flow应该就能用于Gravity column。
【在 C*******e 的大作中提到】
: 因为手上的蛋白有high pI (>10)
: 准备用离子交换柱作为第一步粗提
: 就是直接lysate 9kg离心后上柱子
: 看了看GE的网站
: CM sepharose fast flow resin,weak cation
: SP sepharose fast flow resin,strong cation
: 好像都可以用
: 不过看起来都是要和FPLC一起用的
: 想问问看有没有人知道如果用普通gravity column行不行?
: pack的时候有没有要注意的?
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T**********t
发帖数: 1604 | 3 虽然我都是用FPLC做，不过gravity column应该没问题。要是有条件上FPLC还是上一个
吧，至少可以控制梯度洗脱，自动收集什么的。
强离子交换树脂适用的pH范围广，弱离子交换树脂只在特定的pH范围内适用。不过如果
你用的lysis buffer在7-8左右的话，应该两个都能用。
你可以看看GE的这个IE columns and media selection guide:
http://www.gelifesciences.com/aptrix/upp00919.nsf/Content/86545 |
C*******e
发帖数: 4348 | 4 谢谢!用的就是这个guide
选出来三个
Capto S
SP
CM
然后Capto S比后两个贵一倍
不想用FPLC是本来就是粗提
条件摸好了以后gravity column也比较快
然后后面再上亲和层析(有tag)
还有一个是我们没有空柱子
然后这个县Cation exchange再Affinity的想法我没有试过
不知道好不好使
所以不想一下子再买好多东西
就想gravity column先试试
http://www.gelifesciences.com/aptrix/upp00919.nsf/Content/86545
257628001CC7BA/$file/18112731AH.pdf
【在 T**********t 的大作中提到】
: 虽然我都是用FPLC做，不过gravity column应该没问题。要是有条件上FPLC还是上一个
: 吧，至少可以控制梯度洗脱，自动收集什么的。
: 强离子交换树脂适用的pH范围广，弱离子交换树脂只在特定的pH范围内适用。不过如果
: 你用的lysis buffer在7-8左右的话，应该两个都能用。
: 你可以看看GE的这个IE columns and media selection guide:
: http://www.gelifesciences.com/aptrix/upp00919.nsf/Content/86545
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T**********t
发帖数: 1604 | 5 哦，没有空柱子那就用gravity column先试试吧，空柱子买一根还挺贵的。既然你是粗
提，那就不需要用那么贵的Capto S了。用SP column吧。我的蛋白也是pI在10左右，就
是用SP纯化的。没用过CM柱子。
【在 C*******e 的大作中提到】
: 谢谢!用的就是这个guide
: 选出来三个
: Capto S
: SP
: CM
: 然后Capto S比后两个贵一倍
: 不想用FPLC是本来就是粗提
: 条件摸好了以后gravity column也比较快
: 然后后面再上亲和层析(有tag)
: 还有一个是我们没有空柱子
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C*******e
发帖数: 4348 | 6 谢谢!已经订了.
等东西到了可能还会有技术问题请教哈. |
