t********n
发帖数: 64 | 1 最近做Co-IP，beads用的是GE的Protein G Sepharose 4 Fast Flow，结果发现用的和
我目的抗体同源的IgG也能拉下目的蛋白来，我怀疑是beads的作用，大家有遇到过这种
情况吗？ |
c******r
发帖数: 3778 | 2 non specific binding，很常见。多半是IgG的binding，beads的作用可能性小一点。
多洗洗，或者换一种detergent洗，或者调整一下盐浓度。不行的话还可以换一种igG试
试看。这玩意儿没办法，就是试了。 |
s*********t
发帖数: 600 | |
r********g
发帖数: 109 | 4 可能是没洗干净。如果你probe一下不相关的蛋白（比如一个看家蛋白），你会惊讶地
发现它也和你的目的蛋白“相互作用”。我一般会测一下洗脱液看还有没有蛋白。 |
v*******a
发帖数: 759 | 5 什么方法测洗脱液？够灵敏吗？
【在 r********g 的大作中提到】
: 可能是没洗干净。如果你probe一下不相关的蛋白（比如一个看家蛋白），你会惊讶地
: 发现它也和你的目的蛋白“相互作用”。我一般会测一下洗脱液看还有没有蛋白。
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n***w
发帖数: 2405 | 6 啥叫pre-clear一下？
【在 s*********t 的大作中提到】
: pre-clear一下下。
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s******s
发帖数: 13035 | 7 标准protocol都应该有吧，用beads不加antibody先把背景去掉，然后
再加antibody新beads
【在 n***w 的大作中提到】
: 啥叫pre-clear一下？
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