s******s
发帖数: 795 | 1 想研究protein A与B/C/D等的相互作用。
因为没法（或者很难）把蛋白A偶联到sepharose beads上，但是有commercially
available biotinylated protein A可以直接买（sepharose conjugated with
streptavidin当然也有卖），所以计划通过streptavidin+biotin搭桥，间接把protein
A
结合到sepharose beads上（sepharose-streptavidin + biotin-protein A），然后装
填柱子，然后apply protein B/C/D。
从来没做过avidin+biotin相关的实验，请问有朋友做过类似的么？streptavidin+
biotin的结合够强壮么？
假设 protein C可以与protein A结合，最后形成sepharose-streptavidin + biotin-
protein A + protein C。在wash和elute的时候，有特定的或者通用的条件可以
1。wash掉非特异结合的其他protein
2。特异地elute protein C
3。 且保证sepharose-streptavidin + biotin-protein A还互相结合着么？
如果有朋友做过类似的实验，请问有商用的sepharose-streptavidin推荐么（或者其他
avidin variants conjugated to agarose or sepharose beads）？有相关的protocol
推荐么？
包子跪谢！ |
H****s
发帖数: 301 | 2 我来抛砖引玉吧：
（1）streptavidin+biotin的结合够强壮么？
够！非常够。
（2）在wash和elute的时候，有特定的或者通用的条件可以用吗？
这取决于A和C的结合强度，所以，怎么洗，怎么洗脱需要摸条件。
（3）请问有商用的sepharose-streptavidin推荐么（或者其他avidin variants
conjugated to agarose or sepharose beads）？
你可以试试Miltenyi的streptavidin microbeads或者其它品牌的，非常多。这个技术
比较成熟，基本的protocol可以在文献中很容易找到。
最后，需要考虑的是：你怎么保证商用的biotinylated protein A仍然具有protein A
的生物学活性？或者说biotinylation不会影响到A/B/C/D的结合？
protein
【在 s******s 的大作中提到】
: 想研究protein A与B/C/D等的相互作用。
: 因为没法（或者很难）把蛋白A偶联到sepharose beads上，但是有commercially
: available biotinylated protein A可以直接买（sepharose conjugated with
: streptavidin当然也有卖），所以计划通过streptavidin+biotin搭桥，间接把protein
: A
: 结合到sepharose beads上（sepharose-streptavidin + biotin-protein A），然后装
: 填柱子，然后apply protein B/C/D。
: 从来没做过avidin+biotin相关的实验，请问有朋友做过类似的么？streptavidin+
: biotin的结合够强壮么？
: 假设 protein C可以与protein A结合，最后形成sepharose-streptavidin + biotin-
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s******s
发帖数: 795 | 3 谢谢楼上的回答，10个包子奉上。话说，你的ID。。。。。。
1.结合力够强就好。那我的设计思路基本可行了！
2.washing和elution肯定要摸条件。这个我有心理准备。
3.谢谢，我去多挖挖文献。
4.你的point我get了：）。。。这个没法保证。protein A是个肽段，老板要我不考虑
生物学活性了，只管相互作用（我倒，这还是做science么，不过老板就这样说滴。不
过其实把这个肽段跟biotin共价结合或者直接偶联到sepharose上，或者任何其他偶联
操作，说不定就已经改变了其功能了，所以。。。就不考虑那么多了）
Any input is welcome！有搞过类似的，直接给产品+protocol信息吧，包子求！ |
H****s
发帖数: 301 | 4 protocol你可以参考一下比如Pierce Cell Surface Protein Isolation Kit之类的，
你心里就有数了。Streptavidin beads你也可以用Dyna Straptavidin M-280。对于
biotinylation之后的生物活性，一定要做的，否则你后面可能就是在浪费时间。我曾
经做过一个细胞表面受体的项目，biotin/protein的ratio对蛋白的生物学活性非常非
常重要，特别你的蛋白又是一个肽段的情况下。
谢谢你的大包子，兄弟你太慷慨了。
【在 s******s 的大作中提到】
: 谢谢楼上的回答，10个包子奉上。话说，你的ID。。。。。。
: 1.结合力够强就好。那我的设计思路基本可行了！
: 2.washing和elution肯定要摸条件。这个我有心理准备。
: 3.谢谢，我去多挖挖文献。
: 4.你的point我get了：）。。。这个没法保证。protein A是个肽段，老板要我不考虑
: 生物学活性了，只管相互作用（我倒，这还是做science么，不过老板就这样说滴。不
: 过其实把这个肽段跟biotin共价结合或者直接偶联到sepharose上，或者任何其他偶联
: 操作，说不定就已经改变了其功能了，所以。。。就不考虑那么多了）
: Any input is welcome！有搞过类似的，直接给产品+protocol信息吧，包子求！
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