g*****s
发帖数: 1016 | 1 各位前辈，
小弟最近用magnetic beads (coated with steptavidin)去pull down biotin ssDNA.
在pulldown以后，我有一步工序是加热beads到80摄氏度。我发现streptavidin会从
bead上脱落下来。我洗过很多遍，都是一样的问题。我想知道有没有什么方法能够阻止
这种脱落，谢了！ |
S*R
发帖数: 1057 | 2 加热到这么高稳定，biotin-steptavidin肯定会断吧。
【在 g*****s 的大作中提到】
: 各位前辈，
: 小弟最近用magnetic beads (coated with steptavidin)去pull down biotin ssDNA.
: 在pulldown以后，我有一步工序是加热beads到80摄氏度。我发现streptavidin会从
: bead上脱落下来。我洗过很多遍，都是一样的问题。我想知道有没有什么方法能够阻止
: 这种脱落，谢了！
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g*****s
发帖数: 1016 | 3 我做过实验 biotin-streptavidin断的不多 问题是streptavidin被denature了
【在 S*R 的大作中提到】
: 加热到这么高稳定，biotin-steptavidin肯定会断吧。
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H****s
发帖数: 301 | 4 你的问题是pull down之后，streptavidin还处在二聚体状态，这是导致streptavidin
在后面的加热过程中变性的原因。形成四聚体的streptavidin应该是非常非常稳定的，
加热到100度都未必能够导致streptavidin变性（Fidelio GD，1999）。补救措施，在
pull down之后，加入过量biotin，是反应饱和，然后在加热。
【在 g*****s 的大作中提到】
: 各位前辈，
: 小弟最近用magnetic beads (coated with steptavidin)去pull down biotin ssDNA.
: 在pulldown以后，我有一步工序是加热beads到80摄氏度。我发现streptavidin会从
: bead上脱落下来。我洗过很多遍，都是一样的问题。我想知道有没有什么方法能够阻止
: 这种脱落，谢了！
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f*******e
发帖数: 628 | 5 streptavidin 从 bead 上脱落是不太可能的。
加热 80C 在正常的 buffer 里面，时间不是太长的话应该也没有问题。即使有问题也
是 denature 了，脱落是不应该的。
【在 g*****s 的大作中提到】
: 各位前辈，
: 小弟最近用magnetic beads (coated with steptavidin)去pull down biotin ssDNA.
: 在pulldown以后，我有一步工序是加热beads到80摄氏度。我发现streptavidin会从
: bead上脱落下来。我洗过很多遍，都是一样的问题。我想知道有没有什么方法能够阻止
: 这种脱落，谢了！
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g*****s
发帖数: 1016 | 6 我在pulldown的时候 就是加的过饱和的biotin。不过incubation之后，我在常温下洗
了几遍 然后加热的。
streptavidin
【在 H****s 的大作中提到】
: 你的问题是pull down之后，streptavidin还处在二聚体状态，这是导致streptavidin
: 在后面的加热过程中变性的原因。形成四聚体的streptavidin应该是非常非常稳定的，
: 加热到100度都未必能够导致streptavidin变性（Fidelio GD，1999）。补救措施，在
: pull down之后，加入过量biotin，是反应饱和，然后在加热。
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