z*c
发帖数: 4700 | 1 现在要把3个片段连在一起，然后克隆到一个载体里去。请教如何用PCR实现，尤其如何
设计引物，或者其它简便方法。
比如蛋白A的序列a，蛋白B的序列b，ab之间还要加一段另外的c，组成acb，顺序不能变
。abc都分别在3个不同的质粒里。 | p*****m
发帖数: 7030 | 2 设计引物的时候弄18－20bp的overlap each，三段分别pcr出来放到一起pcr一次就行了
【在 z*c 的大作中提到】
: 现在要把3个片段连在一起，然后克隆到一个载体里去。请教如何用PCR实现，尤其如何
: 设计引物，或者其它简便方法。
: 比如蛋白A的序列a，蛋白B的序列b，ab之间还要加一段另外的c，组成acb，顺序不能变
: 。abc都分别在3个不同的质粒里。
| I***a
发帖数: 13467 | 3 先abc扩，
然后ac扩，
再acb扩，
3段放一起扩，有时候不容易到产物，
a,c,b太长，也不容易得到产物， | r****7
发帖数: 220 | | z*******6
发帖数: 679 | 5 用overlapping primer(17,8bp overlap就够，总共35－40bp)，分别p出a, b, c，然后
混到一起用最外侧的两个引物就能搞定。。。
同2楼。。。 | l********s
发帖数: 70 | |
|
