b**********8
发帖数: 349 | 1 针对某个基因的mRNA 设计shRNA, 靶向第4个exon，western检测KD的效果。用这个基因
编码蛋白的C-terminus antibody检测，跟control shRNA相比，这个shRNAKD的效率接
近100%，但是用这个蛋白的N-terminus antibody去检测，却只有很微弱的（~10%）的
下调。
怎么解释这个现象？ |
Z**********g
发帖数: 222 | |
b**********8
发帖数: 349 | 3
多谢回复，两个抗体都是购自于Upstate公司，他们公司卖这两个抗体已经很久了。WB
出来的size大小也都一致。所以我觉得抗体应该没问题。
另外，mRNA水平确实有非常明显的降低，infection shRNA lentivirus之后72小时就能
看到大约80%的降低。
欢迎更多的讨论。
【在 Z**********g 的大作中提到】
: 咋不怀疑一下抗体呢涅?咋不检测一下mRNA涅?
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c****g
发帖数: 93 | |
b**********8
发帖数: 349 | 5 的确，靶基因有两个isoforms，不过我们设计的shRNA 对两个isoforms都能target。
【在 c****g 的大作中提到】
: 是不是isoform？
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g*********s
发帖数: 350 | 6 The silencing efficiency largely depends on mRNA secondary structure. Two
isoforms have different secondary structure. Can both antibodies detect both
isforms? |
b**********8
发帖数: 349 | 7 Yes
both
【在 g*********s 的大作中提到】
: The silencing efficiency largely depends on mRNA secondary structure. Two
: isoforms have different secondary structure. Can both antibodies detect both
: isforms?
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