s*********t
发帖数: 600 | 1 请推荐一个地方做质谱，要灵敏度足够好。
我们实验室也有合作的做质谱的地方，不过感觉技术不行。我做IP之后，western能检
测到的，跟input相比差不多有50％富集的蛋白，他们质谱居然打不到。而且那个蛋白
不是质谱不能检测，因为别的实验可以做质谱监测到。所以我担心是他们质谱灵敏度不
够。
所以想找一个技术很好，质谱灵敏度很高的实验室或者公司去做
请问怎么样知道质谱灵敏度高呢？需要什么样的质谱仪？
质谱至少应该能检测到1 ng的蛋白质吧？
谢谢！ |
w****s
发帖数: 235 | 2 frankly u better figure out how to get your IP working.. instead of
complaining without knowing anything.. |
s*********t
发帖数: 600 | 3 不是做了western了吗
此外还有银染
western能检测到并且量还不错，只能是质谱灵敏度的问题了吧
【在 w****s 的大作中提到】
: frankly u better figure out how to get your IP working.. instead of
: complaining without knowing anything..
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r***e
发帖数: 2539 | 4 我有一个蛋白，考染都很清楚的带。
结果信号很差，他们说从胶上洗脱蛋白很难（或者电离很难，我不是很懂）。我是想看
整个蛋白分子量。
但是酶（trypsin）切过以后的小片段，据说很好做。
我对这不大懂，提供一点信息而已。
【在 s*********t 的大作中提到】
: 不是做了western了吗
: 此外还有银染
: western能检测到并且量还不错，只能是质谱灵敏度的问题了吧
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K******S
发帖数: 10109 | 5 Theoretically, 1 ng is enough for protein ID and MRM if you use LC-MS/MS
based method. MALDI needs more.
In reality, lots of factors contribute to sensitivity.
【在 s*********t 的大作中提到】
: 请推荐一个地方做质谱，要灵敏度足够好。
: 我们实验室也有合作的做质谱的地方，不过感觉技术不行。我做IP之后，western能检
: 测到的，跟input相比差不多有50％富集的蛋白，他们质谱居然打不到。而且那个蛋白
: 不是质谱不能检测，因为别的实验可以做质谱监测到。所以我担心是他们质谱灵敏度不
: 够。
: 所以想找一个技术很好，质谱灵敏度很高的实验室或者公司去做
: 请问怎么样知道质谱灵敏度高呢？需要什么样的质谱仪？
: 质谱至少应该能检测到1 ng的蛋白质吧？
: 谢谢！
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K******S
发帖数: 10109 | 6 silver stain is notorious for not very compatible with mass spec.
【在 s*********t 的大作中提到】
: 不是做了western了吗
: 此外还有银染
: western能检测到并且量还不错，只能是质谱灵敏度的问题了吧
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K******S
发帖数: 10109 | 7 it is indeed very difficult to get intact protein out of sds gel.
【在 r***e 的大作中提到】
: 我有一个蛋白，考染都很清楚的带。
: 结果信号很差，他们说从胶上洗脱蛋白很难（或者电离很难，我不是很懂）。我是想看
: 整个蛋白分子量。
: 但是酶（trypsin）切过以后的小片段，据说很好做。
: 我对这不大懂，提供一点信息而已。
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s*********t
发帖数: 600 | 8 那是在溶液里面直接去打，还是跑胶之后再打 哪个好，哪个更灵敏
【在 K******S 的大作中提到】
: it is indeed very difficult to get intact protein out of sds gel.
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h*****s
发帖数: 153 | |
K******S
发帖数: 10109 | 10 if you want to measure intact protein mass, just give them solution.
【在 s*********t 的大作中提到】
: 那是在溶液里面直接去打，还是跑胶之后再打 哪个好，哪个更灵敏
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s*********t
发帖数: 600 | 11 请问什么是intact protein？不都是得酶切成肽段吗
帮我做质谱的地方说不要溶液，只要切胶。这也是我不想再找他们的原因，直接打溶液
总比切胶，要少损失一些蛋白，灵敏度也高吧？
【在 K******S 的大作中提到】
: if you want to measure intact protein mass, just give them solution.
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K******S
发帖数: 10109 | 12 that ID said "我是想看整个蛋白分子量"
【在 s*********t 的大作中提到】
: 请问什么是intact protein？不都是得酶切成肽段吗
: 帮我做质谱的地方说不要溶液，只要切胶。这也是我不想再找他们的原因，直接打溶液
: 总比切胶，要少损失一些蛋白，灵敏度也高吧？
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