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Biology版 - SDS-PAGE 蛋白电泳的问题。
相关主题
请教一个SDS-PAGE 电泳问题请问一个 SDS-PAGE 的奇怪问题
跑SDS-PAGE的一个小问题做完蛋白Co-IP后,如何上样跑SDS-PAGE?
SDS-PAGE电泳marker总是跑外8字Re: 弱弱的问题:能检测出来吗?
为什么IP下来的蛋白和input 里面分子量不一样呢?关于SDS-PAGE分子量相似的蛋白
逆天了,PCR产物电泳走不下去是啥原因?请教高人:SDS-PAGE running buffer浓度不对,对实验结果有没有影响?
新手请教Western blot 1.5M Tris pH 8.8的问题有人reuse SDS-PAGE 电泳的buffer?
问个LC-MS和糖蛋白方面的问题2-D Blue Native / SDS PAGE 有没有什么对照的图谱或数据库
关于做SDS-PAGE的acrylamideUREA-PAGE 怎么跑蛋白请教
相关话题的讨论汇总
话题: 蛋白话题: 问题话题: page话题: sds话题: 分子量
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1 (共1页)
y******n
发帖数: 8667
1
最近出来的胶,总是不能显示大于70kd的所有蛋白。看标准蛋白,发现大分子量的片段
分成数份混杂在小分子量的片段中间。(因为我们用的标准蛋白中的72kd 带是红色的
。可以看到红色分成了3份,混在20-50kd片段中间。)
有没有什么建议,哪里有可能出问题了?
s******s
发帖数: 13035
2
自己做的胶?

【在 y******n 的大作中提到】
: 最近出来的胶,总是不能显示大于70kd的所有蛋白。看标准蛋白,发现大分子量的片段
: 分成数份混杂在小分子量的片段中间。(因为我们用的标准蛋白中的72kd 带是红色的
: 。可以看到红色分成了3份,混在20-50kd片段中间。)
: 有没有什么建议,哪里有可能出问题了?

y******n
发帖数: 8667
3

en.

【在 s******s 的大作中提到】
: 自己做的胶?
g*********5
发帖数: 2533
4
marker降解了。
q*******8
发帖数: 768
5
你把你的PROTOCOL贴上来才好分析吗~~~~~还有 有木有去别的实验室借一点LADDER来试
一下啊~也许你们的MARKER坏了而已。72k不算大的,中等而已。。。
y******n
发帖数: 8667
6
应该不是protocol的问题,因为这个我们已经用了很长时间了。出问题是这个月。也不
是marker的问题,因为,用买来的gradient gel跑是没问题的。所以是做的胶的问题。
现在怀疑:1。是30% Acrylamide的问题。
2。是做胶时,Isopropanl没有去除干净。
大家觉得哪个可能性大些?不知道为什么高分子量的带会乱跑,真是很奇怪。
p********e
发帖数: 61
7
不要自己做胶了。买预制的吧。现在预制胶7美元一块。
哥给你算一算:
就是再便宜的博后,工资也有36,000每年吧。
就是一天不歇每年工作360天,每天工资也要100元吧。
就是一天工作10小时,每小时也要10美元吧。
自己做胶,怎么也要1个小时吧,成本至少10美元。
假如你居然每天只工作8小时,周末居然还要休息,逢年过节还要厚颜无耻地休假,那
成本可能就是15元。
如果你恰好还是个千老,工资六七万之多,那你做块胶的成本可能是30美元。
假如你不小心第一块做砸了,还要重做,一块胶的成本可能就是60美元了。
假如你的样品很重要,是几个月辛勤劳动的结晶,由于胶没做好都前功尽弃了,把老板
气病了成本就更高了。
还有,普通胶还好,自己如何做gradient胶?
总之,别自己做了,买吧。7块钱一块,还是值当的。
s******s
发帖数: 13035
8
与其trouble shooting, 还不如都扔了重新买,重新配buffer

【在 y******n 的大作中提到】
: 应该不是protocol的问题,因为这个我们已经用了很长时间了。出问题是这个月。也不
: 是marker的问题,因为,用买来的gradient gel跑是没问题的。所以是做的胶的问题。
: 现在怀疑:1。是30% Acrylamide的问题。
: 2。是做胶时,Isopropanl没有去除干净。
: 大家觉得哪个可能性大些?不知道为什么高分子量的带会乱跑,真是很奇怪。

g*********5
发帖数: 2533
9
Bistris gel is best.
c*********7
发帖数: 148
10
牛人!!!

【在 p********e 的大作中提到】
: 不要自己做胶了。买预制的吧。现在预制胶7美元一块。
: 哥给你算一算:
: 就是再便宜的博后,工资也有36,000每年吧。
: 就是一天不歇每年工作360天,每天工资也要100元吧。
: 就是一天工作10小时,每小时也要10美元吧。
: 自己做胶,怎么也要1个小时吧,成本至少10美元。
: 假如你居然每天只工作8小时,周末居然还要休息,逢年过节还要厚颜无耻地休假,那
: 成本可能就是15元。
: 如果你恰好还是个千老,工资六七万之多,那你做块胶的成本可能是30美元。
: 假如你不小心第一块做砸了,还要重做,一块胶的成本可能就是60美元了。

p******i
发帖数: 1092
11
小声说,博后工资的下限肯定不是36K……

【在 p********e 的大作中提到】
: 不要自己做胶了。买预制的吧。现在预制胶7美元一块。
: 哥给你算一算:
: 就是再便宜的博后,工资也有36,000每年吧。
: 就是一天不歇每年工作360天,每天工资也要100元吧。
: 就是一天工作10小时,每小时也要10美元吧。
: 自己做胶,怎么也要1个小时吧,成本至少10美元。
: 假如你居然每天只工作8小时,周末居然还要休息,逢年过节还要厚颜无耻地休假,那
: 成本可能就是15元。
: 如果你恰好还是个千老,工资六七万之多,那你做块胶的成本可能是30美元。
: 假如你不小心第一块做砸了,还要重做,一块胶的成本可能就是60美元了。

d****h
发帖数: 4291
12
实验室需要磨洋工和灌水的
啥都买了
你要在洋大爷实验室还好
要是华人屁艾,看着你闲着,他的心会心绞痛的,即使不说话一会儿在你眼前晃一下,
一会儿晃一下
晃的你想撞墙
以前呆过一个lab,从缓冲液到lb等大家能共用的东西都是楼里配好的,所有耗材也是
楼下stock有的
也就是一般溶液只需要兑兑水就好了,水也是灭好的,要多少拿多少
于是生产力就解放出来了
你要是坐电脑跟前,歇会儿,即使不是浏览网页,就算是看上一会儿文献,老板就会持
续不断的在你眼前晃。多晃几次你不起来就脸色铁青
后来哥就觉悟了,胶自己配,有时候缓冲液也不用他们配好的,摆一桌子东西,搞的很
忙的样子,活儿比以前出货少了,但是老板就总是笑容满面的了

【在 p********e 的大作中提到】
: 不要自己做胶了。买预制的吧。现在预制胶7美元一块。
: 哥给你算一算:
: 就是再便宜的博后,工资也有36,000每年吧。
: 就是一天不歇每年工作360天,每天工资也要100元吧。
: 就是一天工作10小时,每小时也要10美元吧。
: 自己做胶,怎么也要1个小时吧,成本至少10美元。
: 假如你居然每天只工作8小时,周末居然还要休息,逢年过节还要厚颜无耻地休假,那
: 成本可能就是15元。
: 如果你恰好还是个千老,工资六七万之多,那你做块胶的成本可能是30美元。
: 假如你不小心第一块做砸了,还要重做,一块胶的成本可能就是60美元了。

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