v********a
发帖数: 646 | 1 我们现在都是用的invitrogen的precast胶做WB
用的BUFFER也是Invitrogen的
但是跑出来的带
每个人之间区别很大
有人也许或说样品处理不一样
但是同样的marker，不同的人，在同一块胶上跑出来却有很大差异
有些人跑出来的marker，像公司的广告一样
有些人跑出来的marker，像国内实验室时那样的熊样
请问，如何能提高蛋白质SDS-PAGE胶的分辨率呢？
求大神指点。
谢谢。 |
T**********t
发帖数: 1604 | 2 同家公司的胶的质量也会参差不齐的。其实自己配的胶，只要手熟，不比预制胶差，除
非一定要用梯度胶。
电压不要太高，100V就好了，空白lane也加loading buffer，试试看会不会好一些。另
外注意内电泳槽不要漏buffer。我用Biorad的电泳槽，用久了之后内电泳槽密封不好，
会漏液到外面，如果不注意，跑一半电流就断掉了。所以我都把内外的buffer加到液面
相平。 |
U**l
发帖数: 153 | 3 Invitrogen marker放久了会degrade直接体现为分辨率下降smear band.
Load之前每个well先用running buffer冲一下有时有残余polyacrylamide
还有就是用invitrogen gradient gel反正价钱一样
★ 发自iPhone App: ChineseWeb 8.2.2
【在 v********a 的大作中提到】
: 我们现在都是用的invitrogen的precast胶做WB
: 用的BUFFER也是Invitrogen的
: 但是跑出来的带
: 每个人之间区别很大
: 有人也许或说样品处理不一样
: 但是同样的marker，不同的人，在同一块胶上跑出来却有很大差异
: 有些人跑出来的marker，像公司的广告一样
: 有些人跑出来的marker，像国内实验室时那样的熊样
: 请问，如何能提高蛋白质SDS-PAGE胶的分辨率呢？
: 求大神指点。
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p****t
发帖数: 18 | |
v********a
发帖数: 646 | 5 各位，我各种PAGE胶都跑过，什么native PAGE, Urea PAGE， SDS-PAGE。
蛋白质电泳，我都是用的Invitrogen Gradient gel
跑电泳之前，我都是用DPBS洗洗wells
我会用一点loading buffer pre-run 10分钟
自己感觉细节都注意到了。但是就是不明白为何跑不好。
最近在分离一个RNA结合蛋白，需要很高的分辨率，才能截获目的RNA。
多谢路过解答的各位。 |
i***l
发帖数: 1656 | 6 如果我要好看的胶 自己做
如果想省事，用Precast
【在 v********a 的大作中提到】
: 各位，我各种PAGE胶都跑过，什么native PAGE, Urea PAGE， SDS-PAGE。
: 蛋白质电泳，我都是用的Invitrogen Gradient gel
: 跑电泳之前，我都是用DPBS洗洗wells
: 我会用一点loading buffer pre-run 10分钟
: 自己感觉细节都注意到了。但是就是不明白为何跑不好。
: 最近在分离一个RNA结合蛋白，需要很高的分辨率，才能截获目的RNA。
: 多谢路过解答的各位。
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s******s
发帖数: 13035 | 7 你是都跑不好，还是只有这个蛋白跑不好？
我以前一个糖蛋白，gradiant胶上根本就是smear，自己做的胶是一条带
【在 v********a 的大作中提到】
: 各位，我各种PAGE胶都跑过，什么native PAGE, Urea PAGE， SDS-PAGE。
: 蛋白质电泳，我都是用的Invitrogen Gradient gel
: 跑电泳之前，我都是用DPBS洗洗wells
: 我会用一点loading buffer pre-run 10分钟
: 自己感觉细节都注意到了。但是就是不明白为何跑不好。
: 最近在分离一个RNA结合蛋白，需要很高的分辨率，才能截获目的RNA。
: 多谢路过解答的各位。
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l****b
发帖数: 400 | 8 要好看的胶就得自己做。precast胶是给烂大街的protein的。你有没有reuse buffer？
precast胶用reused buffer一塌糊涂。
【在 v********a 的大作中提到】
: 各位，我各种PAGE胶都跑过，什么native PAGE, Urea PAGE， SDS-PAGE。
: 蛋白质电泳，我都是用的Invitrogen Gradient gel
: 跑电泳之前，我都是用DPBS洗洗wells
: 我会用一点loading buffer pre-run 10分钟
: 自己感觉细节都注意到了。但是就是不明白为何跑不好。
: 最近在分离一个RNA结合蛋白，需要很高的分辨率，才能截获目的RNA。
: 多谢路过解答的各位。
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y****m
发帖数: 37 | 9 楼主是不是在做CLIP？
如果是，可能带RNA的蛋白就是一个smear。
【在 v********a 的大作中提到】
: 各位，我各种PAGE胶都跑过，什么native PAGE, Urea PAGE， SDS-PAGE。
: 蛋白质电泳，我都是用的Invitrogen Gradient gel
: 跑电泳之前，我都是用DPBS洗洗wells
: 我会用一点loading buffer pre-run 10分钟
: 自己感觉细节都注意到了。但是就是不明白为何跑不好。
: 最近在分离一个RNA结合蛋白，需要很高的分辨率，才能截获目的RNA。
: 多谢路过解答的各位。
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v********a
发帖数: 646 | 10
是的，我做的CLIP。
我每次都是用fresh buffer，梯度胶。
谢谢各位解答。
【在 y****m 的大作中提到】
: 楼主是不是在做CLIP？
: 如果是，可能带RNA的蛋白就是一个smear。
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