e**e
发帖数: 166 | 1 25个克隆 最后一个总是有问题 不是突变就是空质粒。
问一下 KapI BamHI双酶切的质粒可以冻在－20 反复用吗？好像旧的很容易自连。
另外， KOD 和Phusion总有突变。 大家还有更好的Taq酶吗？
接着做。 我就不信筛1000个没有一个对的。 |
H*******i
发帖数: 196 | 2 如果一直有点突变/缺失突变，一般是对生长有抑制之类的问题。
不然colony pcr之后至少有80%正确率 |
k*****n
发帖数: 323 | |
d****i
发帖数: 2346 | |
w*e
发帖数: 740 | 5 Q5 PCR很少出错
【在 e**e 的大作中提到】
: 25个克隆 最后一个总是有问题 不是突变就是空质粒。
: 问一下 KapI BamHI双酶切的质粒可以冻在－20 反复用吗？好像旧的很容易自连。
: 另外， KOD 和Phusion总有突变。 大家还有更好的Taq酶吗？
: 接着做。 我就不信筛1000个没有一个对的。
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j****n
发帖数: 3370 | 6 q5和phusion其实是一个东西。。。
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【在 w*e 的大作中提到】
: Q5 PCR很少出错
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j****n
发帖数: 3370 | 7 一直是这个问题的话 怀疑是你gene的问题 可能是对e coli有毒性，所谓的toxic gene
可以考虑换换host，试试较低的温度
以前让DNA2.0合成一个基因，估计是对e coli有毒性，他们也折腾了很久才搞出来 他
们推荐的条件就是我上面说的
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【在 e**e 的大作中提到】
: 25个克隆 最后一个总是有问题 不是突变就是空质粒。
: 问一下 KapI BamHI双酶切的质粒可以冻在－20 反复用吗？好像旧的很容易自连。
: 另外， KOD 和Phusion总有突变。 大家还有更好的Taq酶吗？
: 接着做。 我就不信筛1000个没有一个对的。
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T****u
发帖数: 424 | 8 直接gene synthesis
2.5/base |
y****y
发帖数: 123 | 9 我也刚做了一个
前前后后大概读了20多
到最后都要放弃了结果倒数第二个正好突变在酶切位点上
感动到哭 |
w*e
发帖数: 740 | 10 能深入讲讲换host 和低温？
gene
【在 j****n 的大作中提到】
: 一直是这个问题的话 怀疑是你gene的问题 可能是对e coli有毒性，所谓的toxic gene
: 可以考虑换换host，试试较低的温度
: 以前让DNA2.0合成一个基因，估计是对e coli有毒性，他们也折腾了很久才搞出来 他
: 们推荐的条件就是我上面说的
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w*e
发帖数: 740 | 11 领教了，以为2个名字是二个酶
【在 j****n 的大作中提到】
: q5和phusion其实是一个东西。。。
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e**e
发帖数: 166 | |
