x*****9
发帖数: 68 | 1 好像一般测序啥的都用positive mode
因为我的peptides上有磷酸根， 所以想试一下negative ion mode，
mobile phase
A: 100% H2O 0.1% NH4OH,
B: 5% H2O 95 ACN 0.1% NH4OH
自己pack的 C18 capillary column
在一开始就碰到问题，
发现capillary column很容易堵住， 压力狂升， 最后系统shut down
有时候还能在tip上发现一些白色的crystal， 不知道啥东西
希望版上有经验的同学 指点指点 |
b*******g
发帖数: 1309 | 2 not soluble in in ACN?
negtive ion mode generally is not sensitive, and you can detect phosphorylated peptides in positive mode. |
x*****9
发帖数: 68 | 3 it happens during the column equilibration (before sample injection)
I am worried that maybe the basic mobile phase (with 0.1% NH4OH) partly
dissolved C18 beads. |
m**n
发帖数: 206 | 4 PH seems too high for silica. may try NH4 formate or similar for negative
mode instead. |
h*****t
发帖数: 1226 | 5 其实大部分的磷酸化多肽都可以用正离子模式检测。
【在 x*****9 的大作中提到】
: 好像一般测序啥的都用positive mode
: 因为我的peptides上有磷酸根， 所以想试一下negative ion mode，
: mobile phase
: A: 100% H2O 0.1% NH4OH,
: B: 5% H2O 95 ACN 0.1% NH4OH
: 自己pack的 C18 capillary column
: 在一开始就碰到问题，
: 发现capillary column很容易堵住， 压力狂升， 最后系统shut down
: 有时候还能在tip上发现一些白色的crystal， 不知道啥东西
: 希望版上有经验的同学 指点指点
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o****e
发帖数: 1011 | 6 什么C18？fully endcapped？不是的话，pH7就可以了。
用NH4Ac，不要用NH4OH。如果你不想你pack的柱子本身跟强碱反应的话。
【在 x*****9 的大作中提到】
: it happens during the column equilibration (before sample injection)
: I am worried that maybe the basic mobile phase (with 0.1% NH4OH) partly
: dissolved C18 beads.
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x*****9
发帖数: 68 | 7 多谢大家指点
我以前是做小分子的， 现在转到proteomics， 要学的东西很多啊 |
b**********r
发帖数: 1580 | 8 Same here.
感觉有太多的生物的东西要学，很痛苦.至少biochem这么课要学
【在 x*****9 的大作中提到】
: 多谢大家指点
: 我以前是做小分子的， 现在转到proteomics， 要学的东西很多啊
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v********g
发帖数: 25 | 9 溶剂和positive ion mode一样，ESI极性换一下就行了，照喷。
【在 x*****9 的大作中提到】
: 好像一般测序啥的都用positive mode
: 因为我的peptides上有磷酸根， 所以想试一下negative ion mode，
: mobile phase
: A: 100% H2O 0.1% NH4OH,
: B: 5% H2O 95 ACN 0.1% NH4OH
: 自己pack的 C18 capillary column
: 在一开始就碰到问题，
: 发现capillary column很容易堵住， 压力狂升， 最后系统shut down
: 有时候还能在tip上发现一些白色的crystal， 不知道啥东西
: 希望版上有经验的同学 指点指点
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k****o
发帖数: 728 | 10 If your sample was acidic, salt will form after mixing the sample solution
with the basic gradient buffer. Make sure your sample dissovles well in your
HPLC solvent. Normally phosphopeptides are analyzed under positive mode.
【在 x*****9 的大作中提到】
: 好像一般测序啥的都用positive mode
: 因为我的peptides上有磷酸根， 所以想试一下negative ion mode，
: mobile phase
: A: 100% H2O 0.1% NH4OH,
: B: 5% H2O 95 ACN 0.1% NH4OH
: 自己pack的 C18 capillary column
: 在一开始就碰到问题，
: 发现capillary column很容易堵住， 压力狂升， 最后系统shut down
: 有时候还能在tip上发现一些白色的crystal， 不知道啥东西
: 希望版上有经验的同学 指点指点
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