b**********8
发帖数: 349 | 1 非常感谢。这个链接给出的protocol很详细。但是我又有一个新的问题，在还掉含有转
染复合物的medium之后，新加入的medium中添加了抗生素，这个会对之后感染病毒的细
胞有影响吗？会不会产生很大的毒性？因为慢病毒本身的细胞毒性其实也挺明显的，如
果再加上抗生素的压力的话，感染的细胞岂不是要死光光？ |
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b**********8
发帖数: 349 | 2 多谢回复，其实之前我们用的protocol就是根据tronolab的来的，在我的这个帖子里有
我们之前的方法介绍，http://www.mitbbs.com/article_t0/Biology/31599323.html
根据我最近几次摸索的经验，用磷酸钙转染有个缺陷就是换液之后必须用PBS洗两遍，不洗的
话后面收集的virus里有很多磷酸钙沉淀，感染细胞后medium里面很多黑色的小点点，
这玩意对感染效率影响蛮大的。但是PBS洗的话，293FT细胞很容易就飘起来了。我现在
就想省事点，换个转染试剂转染，换液后直接加新的medium。请问你有用lipo做过吗？
我现在就是没有经验用lipo的话，DNA量该用多少。以10cm dish为例，之前我们四个质
粒加起来一共有40ug，如果用lipo等转染试剂的话，我想应该用不到这么多DNA吧。 |
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d*****r
发帖数: 2583 | 3 I think it's normally invited to publish.
whenever you publish some paper in Nature XXX involving some new method,
they will invite you to publish a Nature Protocol to describe that new
method in detail. |
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d*****r
发帖数: 2583 | 4 I think it's normally invited to publish.
whenever you publish some paper in Nature XXX involving some new method,
they will invite you to publish a Nature Protocol to describe that new
method in detail. |
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l**********1
发帖数: 5204 | 5 if LZ Nature Protocol or Method were hard,
please try Plant Physiol
please refer:
Opportunities to explore plant membrane organization with super-resolution
microscopy. (2010)
Plant Physiol.154:463-466.
PubMed link:
//www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20921164
ps: Plant Cell is hard for only Plant EM modified observation result. |
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k****n
发帖数: 158 | 6 各位同修,
请赐一个梯度离心分离dendritic cells (mouse)的 protocol, 给了文献或者公司的链
接就可,
谢谢 |
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m******5
发帖数: 1383 | 7 expression plasmid linealized,不带任何selection gene
遂决定共转其与一个selection plasmid制作stable transfect cell line
求protocol
最好电转可用的 |
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m******t
发帖数: 109 | 8 i plan to purify dna and rna from minute tissue. please provide relevant
protocol or kit. thanks. |
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H****s
发帖数: 301 | 9 各位同学,谁有Yeast Colony PCR protocol分享一下? 现在用的这个太费时间,费精力,
并且要好几次才能做出来.谢谢啦. |
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H****s
发帖数: 301 | 10 非常感谢这么详细的protocol.这也是我目前也在用的,问题是必须用新鲜的colony,否
则colony PCR成功率就不是很高.
tube.
already |
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d****i
发帖数: 2346 | 11 尾巴已经切回来了，要赶紧做，急求protocol。原来的找不着了。
谢谢！ |
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n********k
发帖数: 2818 | 12 an easiest way is to just try it with GFP-virus and the chance is one need
to optimize or repeat the procedure anyway...I work with adherent cells but
I typically do infection in suspension in small volume, never bother to wash
off the virus etc unless there is any specific reason for it...BTW, if one
knows the principles of viral infections, one might understand more of an
infection protocol---why this not that... |
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l**********1
发帖数: 5204 | 13 Please try NYU Sun-lab free protocol links:
a)
//webdoc.nyumc.org/nyumc/files/sun-
lab/attachments/CPSC.Ch5.Genetic%20Manipulation%20of%20Stem%20Cells.pdf
b)
//webdoc.nyumc.org/nyumc/files/sun-lab/attachments/CPCB.ch19.Tissue%20Analysis.pdf
c)
//webdoc.nyumc.org/nyumc/files/sun-lab/attachments/CPMB.Ch.29.MousePhenotyping.pdf
plus alfa
//biology.hunter.cuny.edu/molecularbio/Class%20Materials%20Spring%202011%20BIol302/Lecture%2023/I
nducible%20Cre.pdf
and beta
//biologie.univ-mrs.fr/upload/p102/Kw... 阅读全帖 |
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z****u
发帖数: 1007 | 14 Tamoxifen拿corn oil 配成20mg/ml 浓度。然后每天给成鼠注射4mg IP. 成鼠对此表示
无压力。情绪稳定。有的protocol还拿酒精稀释。我的经验是那样经常会把老鼠打死。 |
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n********k
发帖数: 2818 | 15 Tamoxifen拿corn oil 配成20mg/ml 浓度。然后每天给成鼠注射4mg IP. 成鼠对此表
示无压力。情绪稳定。
How many days can you inject without killing them? how old are the mice? i
am trying to get your dosing(ours are at between 150mg-180mg/kg)
有的protocol还拿酒精稀释。我的经验是那样经常会把老鼠打死。
Yes, with this one, at our dose, the mice feel the stress after 3 days and
cannot tolerate more than 6 days...lethality could be up to 20-30% with 6-7
doses... |
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k*****n
发帖数: 323 | 16 我做的protocol在incubation和洗的solution和rick的是一样的，你用的是什么bead？ |
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d****7
发帖数: 109 | 17 这个protocol我从三年前开始PhD时候就用，到现在都没问题，你确定你的buffer没问
题？
上结果来看看 |
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b*******n
发帖数: 605 | 18 目前用的是Jackson lab的quick dirty protocol, 如下：
NaOH extraction (quick "dirty" DNA preparation). Reference: Truett GE et al.
2000. Biotechniques 29(1):52-54
Cut 2mm of tail and place into an Eppendorf tube or 96-well plate
Add 75ul 25mM NaOH / 0.2 mM EDTA
Place in thermocycler at 98ºC for 1 hour, then reduce the
temperature to 15°C until ready to proceed to the next step
Add 75ul of 40 mM Tris HCl (pH 5.5)
Centrifuge at 4000rpm for 3 minutes
Take an aliquot for PCR (use... 阅读全帖 |
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s*********t
发帖数: 464 | 19 最近实验室湿法系统有点问题,想试试半干转. 看很多评论说半干转不适合大分子蛋白,
有人说现在半干转问题不大,比较困惑,想问问大家有没有成功的PROTOCOL,我们的是
INVITROGEN仪器.
多谢. |
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W*T
发帖数: 241 | 20 准备做小鼠的脑皮质原代内皮细胞培养，不知道要如何进行？
有没有做过的前辈或者所在的实验室做这个的，能否分享一下protocol？
感谢 |
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s**e
发帖数: 1523 | 21 标题：Generation and Imaging of Brainbow Mice
Tamily A. Weissman, Joshua R. Sanes, Jeff W. Lichtman, and Jean Livet
Cold Spring Harb Protoc; 2011; doi:10.1101/pdb.prot5632
有两篇相关论文，一篇的标题是：generation and imaging of multicolor Brainbow
mice，这个能下，可是另一篇protocol就要交钱了。有access的同学帮帮忙吧，谢谢啦
~！！ |
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b******n
发帖数: 4225 | 23 An absolutely true in a protocol someone gave me once: "We added 888 uL
because it's a lucky number in China."
Comment: Science can be a game of luck so why not increase you chances.
To confirm the findings, we decided to repeat the same experiments in our
collaborator's lab...in Hawaii
Comment: Collaborate with people who work somewhere you want to travel
10 min=had to pee, 30 min=coffee break, 1 hour=lunch time, 72 hours=
weekend, 1 week=went on holiday, 4 weeks=forgot about it, 6 months=someo... 阅读全帖 |
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b***2
发帖数: 348 | 24 我用过清华谢振华的 用于哺乳动物细胞转染的高纯度 质粒 DNA 的制备 的方案，拿到
一大堆用于转染的质粒，花的时间长点，但便宜。
：Try this.
：
：Protocol: a rapid and economical procedure for purification of plasmid or
：plant DNA with diverse applications in plant biology
：Plant Methods 2010, 6:1 doi:10.1186/1746-4811-6-1
：
：【 在 boulders (walnut) 的大作中提到: 】
…… |
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c********b
发帖数: 363 | 25 其实我就用的Midi，抽一次可以用15个样。
而且，柱子还可以放在4度反复用（对同一个construct
midi一个kit要多好多柱子，而且我都是用的100ml的菌液
protocol |
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J****n
发帖数: 156 | 26 我scale up他们的protocol for 100 ml菌液。work得很好，也很容易。
protoplasts |
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h**********r
发帖数: 671 | 27 两个包子求colony pcr的protocol, 用于酵母的。试了好几种方法，都不太好用。我用
于常规的筛选gene knockout和cre-loxp的去除marker.
多谢多谢！ |
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a*****n
发帖数: 2835 | 28 google Yeast colony PCR
I remember there is one protocol using NAOH solution that is very simple. |
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h**********r
发帖数: 671 | 30 两个包子求colony pcr的protocol, 用于酵母的。试了好几种方法，都不太好用。我用
于常规的筛选gene knockout和cre-loxp的去除marker.
多谢多谢！ |
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a*****n
发帖数: 2835 | 31 google Yeast colony PCR
I remember there is one protocol using NAOH solution that is very simple. |
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w***b
发帖数: 89 | 33 Nature Protocols 2, 1998 - 2004 (2007)
Published online: 9 August 2007 | doi:10.1038/nprot.2007.279
An inducible mouse model of colon carcinogenesis for the analysis of
sporadic and inflammation-driven tumor progression
Please send to my mailbox: s****[email protected].
Thank you very much. |
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S*******y
发帖数: 575 | 34 求paper：Nature Protocols 1, 2019 - 2025 (2006)
Published online: 30 November 2006 | doi:10.1038/nprot.2006.286。
苦逼学校没订Nature系列，请好心人发到g****[email protected]。非常感谢！！ |
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C*********m
发帖数: 1 | 36 microdissect的组织，total RNA大概在1-10ng 范围之间
直接RNASeq不够，有没有比较靠普的amplification kit，或者protocol推荐？
万分感谢 |
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d**********9
发帖数: 981 | 37 想将两段不相连的片段通过overlap PCR连接在一起，但是以前没有做过，谁有比较详
细的protocol？
是在普通的PCR之后，再将两段PCR产物extension，然后再用两端的PCR引物作普通的
PCR？无比感谢 |
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d****h
发帖数: 46 | 38 没什么特殊protocol
第一步PCR后跑胶确定产物的质和量
质量好的话，可以不用纯化片段，DpnI digestion后直接作为模板
两个片段大慨1：1加入
多加些第一步PCR产物, 减少循环数（<20) |
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w******y
发帖数: 2504 | 39 大家有分离动物组织（肝脏，心脏）里的ER的PROTOCOL吗？能不能分享一下，谢谢。 |
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p*l
发帖数: 270 | 40 Nature Protocols 和 Nature Methods 有何区别？谢谢 |
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l*****i
发帖数: 1163 | 41 请问有人用过3xFlag做CHIP－Seq么？可以给个Protocol么（未经许可，不会传阅）？
多谢 |
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m******5
发帖数: 1383 | 42 Confocal Image，观察一个transcription factor的relative dosage和其output的关
系。
不知哪位前辈有经验的能不能介绍一个protocol?最好是用image J的
另外，哪个二抗linear range比较好？ |
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R****n
发帖数: 708 | 43 有没有人做过先把核蛋白提出来，然後和DNA或者蛋白Co-IP，用磁珠提纯的。有经验的
能不能提供个Protocol，一点点摸条件太费时间了. Thanks |
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m******5
发帖数: 1383 | 46 目的蛋白是个transcription factor，表达很低。
看了不少Chip protocol，似乎stringency都很高，貌似都是给 histon之类表达量高的
蛋白用的，有同修接触过类似情况么? |
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r******g
发帖数: 600 | 49 我做lipo transfect MCF-7
6 well plate- 2ml culture/well
一下protocol剂量 用于 one sample (1 well)
12.5 lipo diluted in 150uL OPTI-MEM
2.5ug plasmid DNA diluted in 150uL OPTI-MEM
sit in RT for 20'
把上面的两个150uL Mix 约等于300uL
sit for 5'
250uL used for each well for transfection. |
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f**********s
发帖数: 1415 | 50 分离细胞核后，想用denature immunoprecipitation纯化一种可溶性核蛋白，包子求一
个lysis buffer配方和protocol. Thanks. |
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