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n********e
发帖数: 1630 | 2 大家好，
有个western transfer的technical的问题。我们lab用的是一个很笨重的biorad的semi
-dry transfer 仪器。我刚开始做western，transfer的效率总是很差。
protein ladder用的是5ul，
manual上推荐mini gel，8.5cm x 5.5 cm，用10v-15v，30min
我开始用过25v，总是看到有的ladder 到了下面的filter paper上面，同时还有ladder
在gel上面，如果时间长点，gel上就看不到ladder。
后来我用15v，推荐的，40min-60min，还是看到有ladder在gel上面，但是没有在
filter paper上面。说明这个voltage很合适的，不会over transfer。但是高分子量的
ladder， 50kd以上的，总是转不完全。
我的protein只有20kd，理论上根据ladder来看，应该都转过去了。可是我的western跟
同样的sample，在其他lab做的，结果就不一样。抗体都是按照他们的catalog number
买的。但是dete... 阅读全帖 |
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a********k
发帖数: 2273 | 3 能去大公司Genetech做独立PI的能有几个。。。Fresh PhD基本可以pass了
去Glassdoor上面看看小的biotech吧，70-80K的很多，这年头连Life, BioRad这种都能
给出这个数来。 |
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y*****3
发帖数: 961 | 4 门槛高是没错。。lz这背景进去至少是sra吧
life biorad算很不错的公司了吧。。。我找工作时候投的公司，不是glassdoor上查不
到，就是查出来phd也是5-60k，ms/bs就30-40k的。。 |
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r*********g
发帖数: 1160 | 5 我和几个别的课题组share一个大实验室，有一台5年前Biorad买得realtime PCR最近有
问题了，给公司打电话，他们说不做这个model了，所以不管维修了。
因为是我组里一个postdoc最后做得几组试验发现有问题了，我想负责把它修好。不知
道除了Biosurplus还有哪几个专门回收旧仪器翻修的公司所以上来求助？
谢谢大家。 |
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L****e
发帖数: 499 | 6 自己能设计，但是就是不太自信自己设计的。最近特地比较了一下从两篇不同的文章上
copy 的用于同一个基因的QPCR引物，这一做吓一跳，结果完全不一样，其中一对还是
一中国大陆的 cell metabolism文章上的引物，太坑爹了。刚才顺便看了一下bioRad
上的QPCR引物，价格简直吓死人啊 200 reactions 要$120,1000 reactions HPLC 要$
1000,这谁买得起啊。
请问一下大家做QPCR引物都是自己设计还是参考别人的文章，还是直接从公司买啊？ |
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r***e
发帖数: 2539 | 7 不要用film就没有问题，买一套western成像系统，GE的不贵，based on HRP，挺好用，
Biorad的比较贵。
不喜欢那种二抗带荧光的系统。 |
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h*******o
发帖数: 4884 | 10 western也可以做native gel
这个方面 ELISA 没有什么优势
ELISA最大的优势还是在于孔多， 可以重复多，而且更容易加standard curve
这样1是可以高通量， 而且不同时间不同次数做出来的data更容易combine（还是因为
能够更容易放standard curve 进去）
至于显色方面，现在的萤光显色western的线性范围和ELISA没有什么区别了
ELISA的假阳性是比较高的， 所以如果不是对抗体有十足的把握，我宁愿做western，
出了问题也容易分析
这次去开SFN，倒是看到了一个gel free的western system， 类似于biorad的experion
的RNA系统，挺有意思，如果能把体系sample数量做大，倒是一个很好的选择，就是死
贵，lol |
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D*a
发帖数: 6830 | 11 biorad还是什么不是有个15分钟transfer的系统吗 |
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f*****e
发帖数: 223 | 12 用的是Pierce LightShift® Chemiluminescent EMSA Kit, 电泳用Biorad TBE
precast Gel。 按照说明书改变过glycerol和 NP40的量，但总没有shift 和
supershift的条带。探针区域ChIP结果阳性。 请教有啥高招啊 |
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z********8
发帖数: 818 | 13
我用的是4000. biorad没有用过。 licor的用过，我们实验室的人都觉得比fuji的差，
关键是灵敏度，也有可能我们不会用啊。 |
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C*********r
发帖数: 4 | 14 对, 你说的灵敏度是我们倾向选LAS的原因。我们也没有用过Biorad的。对于Licor，
记得原来实验室有Fuji LAS3000后, 就没有人用它了. licor 饭不要喷我哈。。。。
但是Fuji LAS3000现在没有卖的了,4000又太贵了. 不知道２万能不能拿下4000mini
， 如果能就好了. |
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T**********t
发帖数: 1604 | 15 同家公司的胶的质量也会参差不齐的。其实自己配的胶，只要手熟，不比预制胶差，除
非一定要用梯度胶。
电压不要太高，100V就好了，空白lane也加loading buffer，试试看会不会好一些。另
外注意内电泳槽不要漏buffer。我用Biorad的电泳槽，用久了之后内电泳槽密封不好，
会漏液到外面，如果不注意，跑一半电流就断掉了。所以我都把内外的buffer加到液面
相平。 |
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a******7
发帖数: 7936 | 16 我做的是测浓度，
按浓度加RNA到反转cDNA的体系里这样出来的cDNA浓度大约就是统一的
一般用Biorad的kit反转出来到1000ng/ul，我在N年前刚做PhD的时候还测过反转出的
cDNA浓度，比较一致的在1000~1100ng/ul之间，此后的N年里再也不测了，cDNA1:10稀
释后做PCR |
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D***a
发帖数: 516 | 17 我们用biorad的Trans-Blot® Turbo™ Midi Nitrocellulose Transfer
Packs。 |
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d****i
发帖数: 2346 | 18
非常感谢！你这一说，我去看我的照片上偶尔也有一抹，但是不知道是胶的问题还是我
自己没弄好。
我已经order了biorad的NC 膜，大卷的。
我的目的蛋白是17的，买了18%的，可能有点高了,但是没有其他选择了。 |
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R****n
发帖数: 708 | 20 It seems like a new model. Only used their CFX 96 and MJ Mini 48-Well. All
work fine for me. |
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s******y
发帖数: 28562 | 23 我比较担心它那个触摸屏。不知道摸久了是不是会坏掉或者灵敏度降低？ |
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l*****a
发帖数: 1431 | 24 我们有6台，目前还行没什么问题，不过是去年刚买的。 |
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g*********5
发帖数: 2533 | 25 我去年买了个Ｃ１０００，也是触摸屏的，在年底打折，便宜一半。 |
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d****i
发帖数: 2346 | 26 具体效果如何？从网上图片对比看比biorad的gel好很多。但是sample buffer,
running buffer and transfer buffer都不一样，实验室里要完全转过来也不容易。以
前加过SDS sample buffer的蛋白样品据说是在上面跑结果会很不好，如果真是这样，
好多样品以后用起来就不方便了。
用过的朋友说说优点和缺点吧。谢谢！ |
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d****i
发帖数: 2346 | 27
和biorad的gel相比好很多吗？能不能说说个人感觉的优点和缺点？ |
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s******y
发帖数: 28562 | 28 我自己的实验室里两种都在用。对于浓度比较低的样品，NuPAGE 比Biorad的好。
但是对于浓度高的样品反而是倒过来。 |
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d****i
发帖数: 2346 | 30 用的是biorad precast TGX gel。有什么办法能跑的端端正正？
另外，小分子量好像很虚，虽然是4-20%的gel，有什么办法改进？ |
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d****i
发帖数: 2346 | 31
1. 外面没加满基本上也没差别了。
2. 下次仔细看看。
3. 电泳槽子是biorad midi的新槽子，应该没问题。谢谢！ |
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d****i
发帖数: 2346 | 32 非常感谢楼上所有朋友！我会逐一试试大家说的办法看有没有改进。
和biorad的技术支持联系了，他们没有什么帮助性的建议，只是给换了一批新胶。 |
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d****i
发帖数: 2346 | 33 做precasting gel的除了biorad和invitrogen还有哪个公司啊？好像没有了。
我用的是midi的box，都想自己配胶了，就是没找到合适配套的玻璃板子。 |
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f*******a
发帖数: 671 | 34 我用的invitrogen的整套western系统，包括precast的gel,觉得非常好,带型也perfect
，没有遇到过问题。而且操作也挺简单，何不试试invitrogen。
以前我用过biorad,自己用玻璃板子做的gel,也不错。你这种情况我还没有遇见过。 |
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s*****g
发帖数: 7857 | 35 以前也用invitrogen的胶。可他们上样量少（25uL）而且胶只能保存3个月。过期就得
扔。
另外跑胶和transfer时间也比biorad的长。
perfect |
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J*****8
发帖数: 6 | 36 我以前试过ABI的sybgreen，发现粘性很大，就算是做master mix然后分到每个孔里，
体积都不一样，因为有滞留在tip里，所以我喜欢biorad的。 |
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r******k
发帖数: 446 | 37 这个是不是要求买他们自己的抗体？好像普通的抗体不可以用？我们实验室有一台
biorad的，没用过。。。 |
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s******y
发帖数: 28562 | 41 最近我用的是Genscript 的precast gradient gel. 质量还不错。而且关键是只需要4
块钱一片，比大部分公司便宜了一倍。你不妨和你老板说说，让他买这个。
唯一要注意的是。他们的胶虽然直接可以放在Biorad 的tank 里，但是必须用SDS-MOPS
buffer跑 （和invitrogen 的类似）。要放在invitrogen的tank 里也行，但是要加一
个adapter. |
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x******i
发帖数: 172 | 42 我打电话问过他们公司，他们说要我邮寄仪器过去，查下什么问题，大概要几百刀的检
查费用。然后检查后再告诉我修理费用需要多少？
太贵了。大家有什么好的注意么？谢谢先！ |
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r******g
发帖数: 600 | 43 我们们学校里面有一个维修部，我们请他们来检查，便宜一些，然后他们帮我们联系
thermo，买了PCR的配件，然后修好了 |
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x******i
发帖数: 172 | 44 很感谢你的回复。那这个维修部的名称是什么，我好查查看我们学校有没有这个部分。
谢谢你！ |
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a********k
发帖数: 2273 | 46 PCR仪容易坏啊，我们实验室2014半年用坏三台ABI 9700.之前实验室每年都会坏PCR仪 |
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L****e
发帖数: 499 | 47 我们实验室仪器坏了，大家都是默默地放下手头的实验，等在一边，等别人报告老板，
因为谁报告的谁倒霉。这不我前几天就赶枪口上了，一个检测荧光的分光光度计坏了，
我的板子都已经准备好了打算读呢，我一开机发现不工作了，只好告诉老板，他一听就
跳起来了，说前不久送到公司修花了7000刀。我靠，我只好说 I didn't do nothing,
I just turned it on and found it didn't work, since you are boss, I have to
report to you |
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d********0
发帖数: 534 | 48 我以前老板搞笑，竟然在ebay上买了个二手pcr仪，就要几百元 |
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Z******5
发帖数: 435 | 49 我们实验室一台老旧的eppendorf PCR仪（最普通PCR已，不能做梯度、touchdown等）
坏了，显示Tsensor 0 err。找来eppendorf售后检查，说要换一个电路板，15000RMB。
擦，抢钱。
现在电路板自己拆下来玩，看看能不能找出到底哪个传感器坏了。 实在搞不定就买台
新的。 |
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s******c
发帖数: 331 | 50 你说的可能是不带module的，module也要另买，也很贵。 |
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