T******g
发帖数: 21328 | 1 按照运动员标准 1.5g/kg x 70kg = 105g。一个70公斤重的人每天只要105克蛋白质
一个鸡蛋就要50多克了，别说别的肉鱼了。
按照这个标准，我每天吃的蛋白质远远超标了呀。 |
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T*U
发帖数: 22634 | 2 我的意思是，8块鸡胸我可以偶尔可以一天吃完，鸡胸蛋白质含量以及很高了吧。要吃
别的，吃完同量蛋白质，岂不是得吃好几天。 |
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f*******n
发帖数: 5241 | 3 一顿吃3oz的肉不算多啊，才巴掌大一块。加餐也要吃蛋白质，
像greek yogurt，cottage cheese等都是很好的蛋白来源。另
外你吃的米面里也有蛋白质的。 |
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l********y
发帖数: 1327 | 4 这个里面把面和豆子里面的蛋白质也算进去了，这个蛋白质的质量和鸡肉的不能比吧？
估计能吸收的很少啊 |
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u******a
发帖数: 7843 | 5 除了足够蛋白质你还要摄入碳水蔬菜水果什么的, 所以如果不是天生大胃靠自然食谱基
本没戏.
当然你可以认为每磅体重1g蛋白质只是补剂厂商的宣传... |
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T******g
发帖数: 21328 | 6 我开始每天150g左右，P90X的效果很明显了
早上一个yogurt，一个鸡蛋，一杯牛奶/豆奶，100g牛肉/鸡肉，一共大概50g～60g蛋白质
中午一个鱼排/牛排200g左右，大概40~50g蛋白质
晚上鸡肉/牛肉/海鲜，大概30~40g
因为我早上锻炼，所以早上吃的多些
蔬菜水果大概是这些的四五倍 |
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g***l
发帖数: 18555 | 7 你多吃的那点蛋白质，还不如多喝的水伤肾，美国人哪个一天不吃200G的蛋白质，没听
说有几个肾有毛病的，到是心血管有毛病的多 |
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S*******l
发帖数: 1822 | 8 蛋白质是bulid和修复身体的素材
碳水化合物才是维持身体日常运作的燃料
摄入蛋白质用不掉应该会给代谢带来负担 |
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c**********t
发帖数: 8546 | 9 豆腐只是植物性的蛋白质，当然还要多吃动物性的蛋白质 |
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k*****e
发帖数: 22013 | 10 差不多吧，一个蛋白，去掉蛋黄，就才3g蛋白质
一勺蛋白粉，24g蛋白质算是少的了。 |
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d*i
发帖数: 9453 | 11 蛋白粉其实没什么，很普通的补剂。
另外优势就是带入的脂肪少，如果吃肉，摄入同样蛋白质脂肪摄入就高多了。
还有比较重要一点就是蛋白粉吃起来方便。训练完半小时之内应该补充蛋白质，
用蛋白粉很容易作到，如果是吃饭，那就有点麻烦了。 |
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y********0
发帖数: 371 | 12 如果饮食里的蛋白质够了的话，蛋白粉就只有吸收快这一点优势了，但是看了一些文章
说似乎没有健身后马上就要补充蛋白质的说法，说窗口期应该是24小时。所以很犹豫到
底需要吃粉吗？ |
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p*********l
发帖数: 26270 | 13 吃多了还是会胖，因为里面还有carb/fat等别的东西
同样的蛋白质，食补需要吃更多的热量，补充蛋白质的效率远不如蛋白粉
热量吃多了就会胖，管你是健康的whole food还是不健康的processed food |
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X****9
发帖数: 86 | 14 我看了８０－１０－１０那本书，说大多数美国人的比例是４２％，１６％，４２％
Ｆｒｕｉｔａｒｉａｎ们推荐的比例是 ８０％，１０％，１０％
我看我的ｍｙｆｉｔｎｅｓｓｐａｌ
每天推荐的是：
１６５ｇ ｃａｒｂ， ４５ｇ ｐｒｏｔｅｉｎ， ４０ｇ ｆａｔ
大概是：
６６％，１８％，１６％
我尽量多吃蛋白质，比如今天吃下去的就是：121 carb, 95 protein, 20 fat, total
1104 cal
想问问到底怎样的比例比较好呢？我是不是蛋白质吃得有点太多了，对肾的负担太大了
？我不太懂啊，公主或者哪位高人帮忙指点一下？ |
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X****9
发帖数: 86 | 15 请问公主这个有没有什么说法的？理论基础？简单点能让我这样的不太懂生物的人听懂
的。
我看那本８０－１０－１０的书上说，过多的蛋白质摄入，也会给身体带来各种负面的
作用（〉１０％），对４０％的蛋白质，有没有什么证明说人体能够消化吸收并且没有
负面影响的？ |
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p*********l
发帖数: 26270 | 16 这不少吧？说的是营养成分，不是食物本身的重量，很多食物里含有大量的水，比如
100克的生菜里大约有90克是水份。
我几乎没有超过150克的碳水。我每天的比例大概是碳水40-60%，蛋白质20-40%，脂肪
大部分时间都控制在20%以下。
肾没毛病的话，蛋白质代谢不会有问题 |
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w******0
发帖数: 4472 | 17 我认为楼主很可能蛋白质不超标。
而且我不赞成高蛋白饮食，非常不赞同，看了太多负面的东西。
"豆制品等植物蛋白里完全没有胆固醇，也可以放心吃"
看不明白？意思是不用考虑胆固醇
你内行，你来建议怎么吃蛋白质？不要告诉我只能吃蛋白粉哈！～
挑刺还不容易？任何东西吃过多都能找出毛病来 |
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w******0
发帖数: 4472 | 18 不用担心。美国的很多调味品，添加剂，都是SOY BASED。 到处都隐藏着
蛋白质。怕啥。酱油里还有蛋白质呢。多数MM都没算酱油的吧？如果都算
全了，５０克太容易达到了
这个版上，还没见过吃得超过100的
我算是吃得多的了，大部分时间也就是60-80之间，一不小心就在40几 |
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s******t
发帖数: 96 | 19 我喜欢吃豆子，不管黄豆，绿豆，红豆，黑豆还有豆制类产品。查了一下营养成分，黄
豆热量高，碳水高，蛋白质也高。对于在减肥期间应该鼓励摄入还是避免摄入呢？我一
般喜欢榨豆浆，30-50g黄豆，不吃豆渣，这样算下来热量是不是比吃黄豆要低？
黄豆（来自薄荷网）
营养成分 含量(每100克)
热量 359.00大卡
碳水化合物 34.20克
脂肪 16.00克
蛋白质 35.00克
纤维素 15.50克 |
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d****w
发帖数: 1367 | 20 按照myfitnesspal的标准，我的碳水总是不够，蛋白质总超，
碳水：脂肪：蛋白质=4.5：2：3.5的样子
我理解这更好，请大家鉴定下。 |
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a****8
发帖数: 2771 | 21 貌似蛋白质分解成氨基酸，蛋白质摄入太多导致血液偏酸，花掉骨头里的钙，通过尿排
出，同时造成骨质疏松和肾结石。 |
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n**********d
发帖数: 382 | 22 我记得小时候老人总是说，鸡蛋一天不能吃超过两个，不然会吸收不了。
但现在好像每天吃的蛋白质远远超过两个鸡蛋啊，身体会不会吸收不了？还有一个朋友
曾经告诉我，要消化吸收一份蛋白质，就需要两份的碳水化合物，不知道这个说法准确
不准确? |
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Y*******o
发帖数: 3323 | 23 姐妹们有木有这个体会阿，蛋白质吃多了，尿臊屎臭出汗还有味。我原来基本不吃什么
肉的时候，出汗也没啥味道的。 现在平均一天150g蛋白质。 |
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p****n
发帖数: 402 | 24 自认为我蛋白质摄入不足。
一般那种食物效率比较高？就是较少的calories但比较高的蛋白质含量？ |
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r**********a
发帖数: 1067 | 25 我妈吃素二三十年了，最近两年感觉快吃腻了豆腐豆腐皮和鸡蛋，说起来她都觉得不太
想吃。也就每天早上的一碗牛奶还能坚持喝。她喜欢吃奶酪，在我这儿住的时候经常给
她买各种cheese吃，可惜我们家三线城市好像不好买这个东西，而且奶酪里盐太多，对
老年人也不好。想着给她弄瓶蛋白粉吧，又怕她胃不好喝不了凉水冲蛋白粉，她吃得大
部分食物都是热的，我印象中蛋白粉不能和热的东西掺在一起吃，例如和面的时候一起
掺进去作面条吃。
我觉得的她蛋白质吃不够就老想吃甜的，吃很多水果，看她提醒越来越圆锥，我很担心
。ps，我妈七十来岁了。
我想不出来什么其他好办法可以增加让她多吃点蛋白质，大家有啥建议请尽管说。多谢
了。 |
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r**********a
发帖数: 1067 | 26 没有，我回头去myfitnesspal上算算吧。她天天得饮食基本就是白面，小米，蔬菜和一
杯牛奶。她吃很多水果，我觉得她的少吃水果，她不愿意，我觉得是蛋白质不够才会特
想吃水果。而且她腿上没力，驼背的厉害以前，比我高很多现在比我还矮，矮了至少15
厘米，上身胖肚子很大，俩条腿细细的。我觉得是蛋白质和钙不足，补钙她意识到了天
天喝口服液。 |
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I*****n
发帖数: 823 | 27 前些天在gym测了体脂率，12.3%，自己都不太相信。
回来自己家的电子秤上测，是14.5%。记得开始长跑训练前，同样的测是23%，记得这个
数据是因为正好我这年纪的正常高限。
那时候的体重是154磅，现在138，减了17磅。从体脂率变化算，脂肪的减少是13磅，也
就是说长跑以后，有4磅肌肉不见了。
反应在我身上，就是胸肌和臀肌块变小，肩变得方正（三角肌斜方肌变小），肩带肌力
量变弱，引体向上次数从20个减为16个，打羽毛球的时候肩部很容易拉伤。
小腿粗了，但大腿也细了一圈，跟PG变小配合默契。
所以不能小看长跑时候分解的那些蛋白质，尤其longrun的时候很有不少肌肉破坏分解
，或被当做能源物质烧掉了。
此版严肃的runner都知道跑后reload carb的重要，我想说的是，充分补足蛋白质的摄
入同样需要认真对待。
不管你信不信，反正我现在每次longrun以后都会喝上一大杯costco卖的那种muscle
milk，虽然真的很难喝T_Y |
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M*******s
发帖数: 2630 | 28 我想他的意思是，蛋白质在体内是水润状态，每克蛋白质结合2.8克水；你分解掉一磅
肌肉的同时，也释放掉约3磅水分。所以outbacker说你掉17磅脂肪才掉一两磅肌肉的推
测非常靠谱。相反倒是你说话的语气非常不友好，这也是我给你回帖的原因。 |
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y********0
发帖数: 371 | 29 如果饮食里的蛋白质够了的话，蛋白粉就只有吸收快这一点优势了，但是看了一些文章
说似乎没有健身后马上就要补充蛋白质的说法，说窗口期应该是24小时。所以很犹豫到
底需要吃粉吗？ |
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y********0
发帖数: 371 | 30 如果饮食里的蛋白质够了的话，蛋白粉就只有吸收快这一点优势了，但是看了一些文章
说似乎没有健身后马上就要补充蛋白质的说法，说窗口期应该是24小时。所以很犹豫到
底需要吃粉吗？ |
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c******n
发帖数: 16666 | 31 重点不是蛋白质
蚁力神当时拉了赵本山做代言
吹得花好稻好 各种snake oil
然后去找农民养殖 让农民买他们的材料之类的
自称包收 农民么一看 赵本山都代言了
而且头两次如同所有的旁氏骗局 都按时收货给钱
之后的么也和所有的旁氏骗局一样了。。
这个也一样，论蛋白质产生 蟑螂有这么多壳，应该比不上苍蝇的幼虫吧
然后那个什么翅膀上的物质也语焉不详 既然都做大了还怕说出来？ |
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t*******d
发帖数: 2570 | 32 几率的算法算错了。用现代生命里的蛋白质当第一个蛋白质这个前提也设错了。 |
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a**********e
发帖数: 418 | 33 现在我们知道体能蛋白质是由DNA指示而合成的。当然最初蛋白质的产生可能不是这样
的，不然的话就得解释DNA是怎么来的。但至少说明了化学进化起源论是很不可能的事
情.但若不是化学进化起源的话，还有什么非神造论论可以解释的呢？ |
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B******y
发帖数: 2255 | 34 如果产生特定氨基酸长链的时间在宇宙年龄之内，那么我们就要承认自然起源蛋白质的
这个可能性是存在的。信仰进化论的人在这一点上就不是盲目的了。
在这一点之外，夸大和缩小这个结论都不恰当。
比如不可夸大说因此生命就可以自然起源，因为还有从蛋白质到一个能新陈代谢的系统
的gap需要回答。多个步骤的理论，每步的证据只能说明本步，不能由一步证明全部。
阁下所说因此证明神是假的，是不是跳得太远了。
因为一个东西放在面前，如果我们知道这个东西人可以造出来，自然也可以造出来，那
么该东西是怎么出来的，就只能从历史那边去回答。不能说因为自然可以造出来，就证
明它不是人造的。证明不是人造，还需排除人造的证据。
所以进化论如果能从实验验证上验证生命起源诸步骤皆可从无机宇宙达成，那么进化论
是自洽的，信仰进化论就是无可厚非的。
但如果由此要排除今天这个生命体系是神造的可能，那还需要更多能排除这个可能的证
据，这个证据，俺也不知呢。
所以俺的贴子质疑进化论是无证据的信仰，若有，俺的观点错了。
要由此推出基督教的信仰错了，却是逻辑上不通的，那需要能否定基督教的证据。
所以在无证据的情况下，进化论是Pure beli... 阅读全帖 |
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T*******r
发帖数: 333 | 35 首先纠正你的一个错误。“接受”进化论和“信仰”进化论是两个不同的概念。我个人
估计你的“信仰”都是“接受”的意思。
“接受”进化论不需要*完全的*“证明”，只要有*足够强*的正面证据并且没有反例，
就可以“接受”进化论是解释生物进化的最优理论，“以进化论为真”。
而“信仰”进化论则是“无论如何进化都是真的”，就算有反面证据也不改变看法。这
种行为和“信仰”基督没有本质区别。
如果你仔细看我的原帖，我关注的是什么条件下你能够“接受”进化论。也就是说，什
么情况下你会认为证据“足够强”而同意进化论为真。这个标准因人而异，有的人标准
不严格，要求的证据弱一点，根据化石证据就接受，而有的人标准严格一点，要求较强
的证据，比如需要证据证明无机物产生蛋白质，证明蛋白质开始进化，证明进化有能在
足够短的时间产生各种各样的生物等等。但是无论这个标准是严格还是宽松，这个标准
本身是存在的。人们根据这个标准“接受”或者“拒绝”进化论。
相反，如果这个标准本身就不存在，那么这个人要么“信仰”进化论为真，要么“信仰
”进化论为假，也就是说任何证据都不能改变他的看法。
注意，这个标准存在与否于我们目前有什么样的... 阅读全帖 |
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B******y
发帖数: 2255 | 36 回下这个。
Response:
1.The calculation of odds assumes that the protein molecule formed by chance
. However, biochemistry is not chance, making the calculated odds
meaningless. Biochemistry produces complex products, and the products
themselves interact in complex ways. For example, complex organic molecules
are observed to form in the conditions that exist in space, and it is
possible that they played a role in the formation of the first life (Spotts
2001).
是啊，任何一个100个氨基酸的长链都是极为复杂的complex product, ... 阅读全帖 |
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B******y
发帖数: 2255 | 37 呵呵，俺只说了氨基酸长链这个一维即一级结构的信息，蛋白质真正的三维信息更为复
杂，且功能由其三维结构最终决定。这个算是科普知识吧，俺是简化了问题呢。
阁下的引申事实明白，但意图模糊呢。
是说自然形成蛋白质更难呢，还是更容易呢？
听说
个确
400
构象 |
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n**t
发帖数: 45 | 38 【 以下文字转载自 Biology 讨论区,原文如下 】
发信人: royluo ( 罗马情结), 信区: Biology
标 题: 从纯化到星辰---CSH蛋白质纯化课侧记（二）
发信站: Unknown Space - 未名空间 (Thu Apr 28 14:44:32 2005) WWW-POST
本文献给YL
（二）同学和老师
冷泉港的《蛋白质纯化与鉴定》培训班历史相当悠久，从1989年开始每年都开课，到今年是第十六次。每
年都是四月初开始，持续两个星期。值得一提的是，冷泉港有相当多的培训班和会议，是一个科学家交流和
学习的中心。这是冷泉港享有盛名的最主要原因。
2004年底, 我下定决心上这门课，于是递交了申请。二月份的时候的到消息，我被录取了，并且还有
1000刀的tuition waiver。可我还是高兴不起来，因为还得解决1600刀(学费一共2600刀)。老板人很nice,
但是他实在没钱了，所以我只好咬咬牙自己套腰包解决了，去年的退税就这样全搭进去了, 欲哭无泪啊。
四月五号下午我赶到冷泉港，办完登记手续后被告知晚上七点全体开会，与教员和同学见面。老师一共有四 |
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n**t
发帖数: 45 | 39 【 以下文字转载自 Biology 讨论区,原文如下 】
发信人: royluo ( 罗马情结), 信区: Biology
标 题: 从纯化到星辰---CSH蛋白质纯化课侧记（三）
发信站: Unknown Space - 未名空间 (Thu Apr 28 17:44:52 2005) WWW-POST
本文献给YL
（三） 不溶的sigma32
四月六号早上，我们开始了第一模块的实验，Burgess教授负责。这老兄研究了一辈子E.Coli的RNA polymerase。E.Coli RNA polymerase 核心酶是一个蛋白质复合体，只有合成RNA的活性，却没有
识别DNA的能力。Sigma系列因子能够识别启动子, 并且与核心酶结合，从而实现转录。我们这个实验
的核心主角就是其中一个因子，叫sigma32。Sigma32可以识别heat shock genes的启动子。Sigma 32
过表达在大肠杆菌里面的时候，绝大部分形成了不溶的包涵体(inclusion body),我们的任务就是要用变性
剂溶解变性不溶的蛋白，然后做重折叠。
所有的buffer几乎都已经配好了 |
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n**t
发帖数: 45 | 40 【 以下文字转载自 Biology 讨论区,原文如下 】
发信人: royluo ( 罗马情结), 信区: Biology
标 题: 从纯化到星辰---CSH蛋白质纯化课侧记（七）
发信站: Unknown Space - 未名空间 (Thu Apr 28 18:15:35 2005) WWW-POST
本文献给YL
（七）古怪的CDC6
这里再给大家讲一个在大肠杆菌中表达蛋白质的例子，一个很夸张的例子，但是很有启发性。
Bruce Stillman 是冷泉港的现任主管，是一个绝对的牛人。不但科学做得很好，而且还很爱
国。他是澳洲人，在美国待了N年，却从没有加入美国国籍，所以他只是外籍院士。我们的晚间报
告有一个是他作的。他主要研究真核生物的DNA复制。这是一个到现在为止都没有完全弄明白的领
域。在报告里面，他特别提到了表达纯化CDC6蛋白的经历，我觉得十分有意思。这个蛋白, 用他
的话说，是"a pain in the ass"。
CDC6是干什么的呢？这要从ORC说起。真核生物的DNA有多个复制起始位点(replication
origin)，ORC(Origin R |
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n**t
发帖数: 45 | 41 【 以下文字转载自 Biology 讨论区,原文如下 】
发信人: royluo ( 罗马情结), 信区: Biology
标 题: 从纯化到星辰---CSH蛋白质纯化课侧记（八）
发信站: Unknown Space - 未名空间 (Fri Apr 29 11:14:36 2005) WWW-POST
本文献给YL
（八）”液体DEAE“
绕了这么大一圈，现在再回到第一个模块的实验来。前面提到Dr.Burgess要我们
试Gudn HCl溶解sigma32之后的重折叠，结果很糟糕。我们接着试了用sarkosyl做
变性剂的蛋白重折叠。步骤和前一个类似，只是这一次是突然稀释至25倍体积。效果
好了很多，至少没有浑浊现象了。接着我们用Poros HS 50，一种阳离子交换柱，
来把可溶的sigma 分离了出来。为什么这一次用Poros HS 50 而不是前面用的阴离
子交换柱呢？因为sarkosyl带负电，会与阴离子交换柱结合得很好。再加上sigma32
很奇怪，既有负电的表面，又有带正电的表面，所以可以用阳离子交换柱。值得一提
的是绝大部分蛋白质都是偏酸性，所以阴离子交换柱用 |
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n**t
发帖数: 45 | 42 【 以下文字转载自 Biology 讨论区,原文如下 】
发信人: royluo ( 罗马情结), 信区: Biology
标 题: 从纯化到星辰---CSH蛋白质纯化课侧记（十）
发信站: Unknown Space - 未名空间 (Wed May 11 20:43:26 2005) WWW-POST
本文献给YL
（十） 永远的转录因子
第一个模块的实验结束以后，我们进入第二个模块的实验。这个实验的指导教授叫Al Courey。
这个模块的实验主要是要从Hela细胞里纯化AP-1。AP-1是一种很重要的sequence specific转录因
子，在很多生理过程里都有作用。AP-1其实不是一种均一的蛋白质，实际上一种二聚体结构，要么
是Jun-Jun 或者是Jun-Fos dimer。Jun和Fos都是alpha helix的结构。Helix的一边有很多Leu,和
另一个helix形成Leucine Zipper的结构，而helix另一边就是碱性的氨基酸居多，所以可以和DNA
结合。这个转录因子看起来就象一双筷子夹着DNA。
sequence spec |
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y**********o
发帖数: 7947 | 43 蛋白质缺乏的明显症状。体重每镑x0.37=每天最低蛋白质需要
难怪，难怪
Ridges or deep lines in finger and toe nails
Slowness in healing wounds, cuts, scrapes, and bruises
Difficulty sleeping
Crankiness, moodiness
Severe depression
Anxiety
Lack of energy, no desire to do things |
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l**********n
发帖数: 8443 | 44 蛋白质组计划是蛋白质的三维结构？这个不是施一公在搞的吗？ |
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r****o
发帖数: 105 | 45 本文献给YL
（四）Hydrostatic pressure和跑小柱子的trick
Dr. Burgess 假定我们对蛋白质纯化一无所知，所以讲得很细致。比如他特别提到了disposable
column的用法。这种小柱子很简单，把beads倒进去，冲洗一下就可以用来纯化蛋白了，很方便。
唯一的问题是，由于是依靠重力跑，速度有时候会十分慢。液体流经柱子速度由hydrostatic pressure
(静流体压力）来决定。而hydrostatic pressure又是由实际柱高(即液体经过的长度)来决定。如果你
嫌液体流得太慢（尤其是洗柱子的时候），可以在柱子下端出口连一个长的塑胶管子或者针管，这样速
度会快很多。这是很简单的小trick, 但我觉得对初做蛋白质纯化的人还是很有帮助的。
我知道一个例子。我原来很喜欢女生A, 有一天晚上主动等在她实验室等她做完实验，就开车送她回家。
这一等不得了，从晚上七点等到了凌晨一点。这个过程中，她好像没什么事情，但是每隔20分钟，她就会去
一次cold room。作完实验了之后，我好奇的问她，到底是什么试验花了这么长时间，结果她说她在用一个dispo |
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r****o
发帖数: 105 | 46 本文献给YL
（十） 永远的转录因子
第一个模块的实验结束以后，我们进入第二个模块的实验。这个实验的指导教授叫Al Courey。
这个模块的实验主要是要从Hela细胞里纯化AP-1。AP-1是一种很重要的sequence specific转录因
子，在很多生理过程里都有作用。AP-1其实不是一种均一的蛋白质，实际上一种二聚体结构，要么
是Jun-Jun 或者是Jun-Fos dimer。Jun和Fos都是alpha helix的结构。Helix的一边有很多Leu,和
另一个helix形成Leucine Zipper的结构，而helix另一边就是碱性的氨基酸居多，所以可以和DNA
结合。这个转录因子看起来就象一双筷子夹着DNA。
sequence specific转录因子是极其重要的一类蛋白质，真核生物的基因有5~10%是用来编码
这种蛋白的。这个模块涉及的一些实验是最经典的一些分离转录因子的方法，所以很有用。
怎么才能分离纯化呢？首先要确定要纯化什么因子，换句话说就是要决定纯化跟什么特异DNA
序列相结合的转录因子。决定了这个，才能有一个活性检测系 |
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r****o
发帖数: 105 | 47 本文献给YL
（十四）anfinsen的疑虑
跑完sephacryl柱子，组分就可以过DNA affinity column。DNA affinity column虽然很重
要，但是这一步技术上来说要求很低。买来CNBR活化好的agarose，然后让特定序列的寡聚核
苷酸固定上去就行了，柱子也是最简单便宜的一次性柱子。
亲合层析是目前最常用也最强大的一种蛋白质纯化技术, 纯化效率比别的层析方法可以高出一
两个数量级。这种方法诞生是六十年代的事情。当时是在NIH的Anfinsen实验室。Anfinsen是一
个诺贝尔奖获得者，可以说是蛋白质折叠研究的老祖宗。他主要贡献是通过研究ribonuclease 的
变性和重折叠证明氨基酸序列就可以决定蛋白质最后的三维结构。他实验室那时侯有一个学生一
个project是从葡萄球菌里面提取大量核酸酶，然后研究enzyme-inhibitor interaction。这个纯
化可是很麻烦的事情，用gel filtration, ion-exchange, hydrophobic interaction, 效率都很
低。有人可能会问，怎么不在E.Coli |
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r****o
发帖数: 105 | 48 本文献给YL
（二十三）正相与反相
我们纯化出钙调蛋白之后，就开始进行一些蛋白质化学的分析。主要是蛋
白酶消化，反相HPLC分析，MALDI-TOF质谱之类的分析。我觉得在这个课程
里面加一个质谱分析并不是那么有用，因为基本上只是演示实验，只是讲了讲
皮毛而已。相比之下反相HPLC在蛋白质纯化中要重要得多。
HPLC的全称是High Performance Liquid Chromatography （高效液
相色谱），这个名称听起来好像很尖端的样子，其实HPLC组成部件非常简单，
主要是三部分，泵，柱子，和UV monitor。反相HPLC跟一般的色谱的一个显
著不同是压力。为了保证纯化蛋白的分辨能力，反相HPLC柱的matrix材料颗
粒非常精细，所以必须施加很大的压力才能跑得动柱子。相比之下，反相HPLC
所需压力比一般gel filration柱子压力大十倍都不止。反相HPLC的分辨度十分
惊人，远远超过其他色谱方法。分辨度高到什么地步呢，我举一个自己的例
子。我原来在E.Coli里面表达EGF repeat，大概有7到8KD的样子，然后用体
外反应加上一个fuc |
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r****o
发帖数: 105 | 49
本文献给YL
（二十四）尾声
蛋白质纯化第十三天，也就是最后一天的时候，大家基本上都松弛了
下来，开始准备狂欢。先是每人发了一件纪念T shirt，然后在CSHL的酒
吧里面开酒会，再接着就是龙虾宴。不过气氛最热烈的还是龙虾宴之后
的诗会。诗会我还是第一次碰到，要求每人写一首跟蛋白质纯化有关的
诗，并且当众朗读，场面十分热闹和搞笑。我好不容易写了一首，是这
样的：
My protein
My protein used to be wild,
Like a naughty child,
He likes to play seek and hide,
which makes me feel really tired,
But now I can find him no matter it is day or night,
Because from Dick, Al, Sue-hwa and Constantin,
I have learned how to Purify!
诗会之后，绝大部分同学和老师都在活动室打乒乓球 |
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