C********e
发帖数: 329 | 1 国内实验室，想采购FluorChem Q 蛋白印迹成像和定量分析系统 或者 红外激光扫描成
像系统，用于westernblot分析定量，请教各位选择哪款比较合适，美国这边更多的还
是用film exposure吧。 |
h*****o
发帖数: 342 | 2 我在的这个实验室用的是fluorchem，可以用来做western和dna跑胶的定量，挺不错的
【在 C********e 的大作中提到】
: 国内实验室，想采购FluorChem Q 蛋白印迹成像和定量分析系统 或者 红外激光扫描成
: 像系统，用于westernblot分析定量，请教各位选择哪款比较合适，美国这边更多的还
: 是用film exposure吧。
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d****u
发帖数: 1553 | 3 我在国内用一个公司叫li-cor的成像系统，我很喜欢，到了美国来还是用这个 |
c*********r
发帖数: 1312 | 4 Li-cor的Odyssey我们也在用，做western、protein gel扫膜扫胶都效果很好。 |
n**********1
发帖数: 251 | 5 使用Odyssey，是不是二抗要是荧光的，普通的HRP好像不行吧。 |
c*********r
发帖数: 1312 | 6 要远红外荧光的http://www.licor.com/bio/products/reagents/irdye_secondary_antibodies/irdye_secondary_antibodies.jsp
其它公司也有相应的产品，一支二抗可以用很久，稀释度都在1：12000到1：15000左右
。。。
【在 n**********1 的大作中提到】
: 使用Odyssey，是不是二抗要是荧光的，普通的HRP好像不行吧。
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d****u
发帖数: 1553 | 7 对的，但是不用底物，所以并不比普通的二抗＋底物贵。
【在 n**********1 的大作中提到】
: 使用Odyssey，是不是二抗要是荧光的，普通的HRP好像不行吧。
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C********e
发帖数: 329 | 8 是的，我说的那个红外激光扫描成像系统就是LICOR ODYSSEY.但功能好像没有
flurochem多。如果要用猪、鸡等动物的荧光二抗，不知是否能买到？而且不能用ECL吧
？ |
d****u
发帖数: 1553 | |
f*********r
发帖数: 1233 | 10 岂不是你们的western膜及其容器都被EB污染了？除非你们买两台。
【在 h*****o 的大作中提到】
: 我在的这个实验室用的是fluorchem，可以用来做western和dna跑胶的定量，挺不错的
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f*********r
发帖数: 1233 | 11 我比较喜欢这个公司的二抗。条带清晰，特异性高，交叉反应比较少，背景干净。价钱
不贵。500ul还不到200块。
不过用licor机器，blocking的时候和稀释抗体的时候，最好用专用的blocking buffer
。一般是licor自己出的buffer，或者是rockland的buffer。用albumin配或者用奶粉好
象效果不太好。好在buffer可以回收再利用。
【在 d****u 的大作中提到】
: 你可以到这个公司的网站上去看看有没有你需要的二抗。http://www.rockland-inc.com/
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f*********r
发帖数: 1233 | 12 不光是二抗价格的问题。更重要的是，省去了底物反应时间，省去了暗室底片曝光的麻
烦。而且，荧光持久，几个月之后重新扫描仍然清晰。
再有，二抗可以配不同颜色（波长）的荧光。这样一来，同一分子量的两种蛋白可以一
次incubate和成像。例如，需要染磷酸化x蛋白（p-x）和总x蛋白（t-x）。p-x一抗是
mouse的，配上anti-mouse 680（波长）二抗，扫出来是红色；t-x一抗是rabbit的，配
上anti-rabbit 800的二抗，绿色。一张膜就搞定了。定量是，两种颜色互不影响。算p
-x/t-x比值的时候，也不用拿GAPDH或者beta-actin来normalize。
【在 d****u 的大作中提到】
: 对的，但是不用底物，所以并不比普通的二抗＋底物贵。
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f*********r
发帖数: 1233 | 13 rockland有抗猪、抗鸡的近红外荧光二抗。
不是不能用ecl，而是根本就不需要。不用买底物，不用买胶片，不用胶片机和冲印药
水，不用建暗室。
还有个好处，如果曝光时间不合适，可以任意调整，重新扫描。不会浪费胶片等耗材。
【在 C********e 的大作中提到】
: 是的，我说的那个红外激光扫描成像系统就是LICOR ODYSSEY.但功能好像没有
: flurochem多。如果要用猪、鸡等动物的荧光二抗，不知是否能买到？而且不能用ECL吧
: ？
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s******y
发帖数: 28562 | 14 Oddysey 得缺点是背景太强。而且如果有灰尘什么的话就会出现一个大亮点。
有气泡的话更是了不得。
一般来说，我做完之后都必须把膜晾干了才能去定量，否则很不准。
不过好处就是给了我一个偷懒的借口。每天做完之后把膜往柜子里一放就好了，
第二天再去扫描。
算p
【在 f*********r 的大作中提到】
: 不光是二抗价格的问题。更重要的是，省去了底物反应时间，省去了暗室底片曝光的麻
: 烦。而且，荧光持久，几个月之后重新扫描仍然清晰。
: 再有，二抗可以配不同颜色（波长）的荧光。这样一来，同一分子量的两种蛋白可以一
: 次incubate和成像。例如，需要染磷酸化x蛋白（p-x）和总x蛋白（t-x）。p-x一抗是
: mouse的，配上anti-mouse 680（波长）二抗，扫出来是红色；t-x一抗是rabbit的，配
: 上anti-rabbit 800的二抗，绿色。一张膜就搞定了。定量是，两种颜色互不影响。算p
: -x/t-x比值的时候，也不用拿GAPDH或者beta-actin来normalize。
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d****u
发帖数: 1553 | 15 Oddysey背景强的这个问题我也碰到过，我现在是封闭和一抗二抗都用他们的封闭液，虽然贵点，但是好在我现在做的没
有以前在国内那么多，也还好。你可以试试.另外我扫描的时候从来都不把膜弄干，有点液体更容易减少气泡，干的膜上面
沾了灰尘反而容易显色。
【在 s******y 的大作中提到】
: Oddysey 得缺点是背景太强。而且如果有灰尘什么的话就会出现一个大亮点。
: 有气泡的话更是了不得。
: 一般来说，我做完之后都必须把膜晾干了才能去定量，否则很不准。
: 不过好处就是给了我一个偷懒的借口。每天做完之后把膜往柜子里一放就好了，
: 第二天再去扫描。
:
: 算p
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s******y
发帖数: 28562 | 16 我一直都是用他们的blocking buffer的，没敢讨巧。
不过，最近我比较了一下，发现Roche 的caisein 溶液效果也差不多
【在 d****u 的大作中提到】
: Oddysey背景强的这个问题我也碰到过，我现在是封闭和一抗二抗都用他们的封闭液，虽然贵点，但是好在我现在做的没
: 有以前在国内那么多，也还好。你可以试试.另外我扫描的时候从来都不把膜弄干，有点液体更容易减少气泡，干的膜上面
: 沾了灰尘反而容易显色。
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s******y
发帖数: 28562 | 17 另外，现在国内实验室这么有钱啊？
我们是去年整个系才买了一台，而且大家都省得一塌糊涂。我们去别的实验室借了一下
他们的
抗体（就一点点），被逼着保证一定要还他们。
【在 C********e 的大作中提到】
: 国内实验室，想采购FluorChem Q 蛋白印迹成像和定量分析系统 或者 红外激光扫描成
: 像系统，用于westernblot分析定量，请教各位选择哪款比较合适，美国这边更多的还
: 是用film exposure吧。
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d****u
发帖数: 1553 | 18 降低背景好像主要是靠马来酸和吐温，下次我试试加点有没有用 |
d****u
发帖数: 1553 | 19 呵呵，国内实验室还是有点钱的，我在国内的时候我们实验室是全大陆第一台（据说哦
，不负法律责任）。我还替他们做
了好多次广告卖出去好多台，他们也不给我提成，:(。不过你们那也太扣了吧，我到美
国没几天，去我们公共实验室问人家
正好有一瓶blocking buffer，就送我了。抗体也是我们老板说你要什么就都买了吧，
我就把抗兔的，抗鼠的，抗羊的各买
了一管，呵呵！
【在 s******y 的大作中提到】
: 另外，现在国内实验室这么有钱啊？
: 我们是去年整个系才买了一台，而且大家都省得一塌糊涂。我们去别的实验室借了一下
: 他们的
: 抗体（就一点点），被逼着保证一定要还他们。
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s******y
发帖数: 28562 | 20 tween20?
Licor的技术人员特意的跟我们说过，不许在抗体溶液里加这个。
洗液里加这个倒是没有问题。
另外，我有点好奇的是maleic acid 到底是干什么用的？是抗菌剂么？
【在 d****u 的大作中提到】
: 降低背景好像主要是靠马来酸和吐温，下次我试试加点有没有用
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s******y
发帖数: 28562 | 21 你们实验室可能有钱吧。我们非常抠非常抠。我们的抗兔抗鼠二抗都是Licor送的免费
样品，
就那么一小管。一直用了两年了。
其他抗体，要买之前都要缠老板缠半天。
blocking buffer 我不喜欢回收的，因为担心长霉菌。缠了老板半天终于同意我买了一
大瓶，
但是每次只能用1mL.
【在 d****u 的大作中提到】
: 呵呵，国内实验室还是有点钱的，我在国内的时候我们实验室是全大陆第一台（据说哦
: ，不负法律责任）。我还替他们做
: 了好多次广告卖出去好多台，他们也不给我提成，:(。不过你们那也太扣了吧，我到美
: 国没几天，去我们公共实验室问人家
: 正好有一瓶blocking buffer，就送我了。抗体也是我们老板说你要什么就都买了吧，
: 我就把抗兔的，抗鼠的，抗羊的各买
: 了一管，呵呵！
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d****u
发帖数: 1553 | 22 我记得是封闭的时候不能加tween，一抗二抗了反而要加，去掉背景。马来酸干啥的不
知道，就知道抗菌是叠氮钠。
【在 s******y 的大作中提到】
: tween20?
: Licor的技术人员特意的跟我们说过，不许在抗体溶液里加这个。
: 洗液里加这个倒是没有问题。
: 另外，我有点好奇的是maleic acid 到底是干什么用的？是抗菌剂么？
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s******y
发帖数: 28562 | 23 你应该是记错了。tween20会干扰一些抗体的结合，在某些情况下会降低特异信号。
当然大部分情况下是无所谓的。
如果是用HRP, NaN3是绝对不可以用的。不过Licor就无所谓了。
我刚才查了一下google, Maleic acid 的确是抗菌剂，和背景没有太大关系。
【在 d****u 的大作中提到】
: 我记得是封闭的时候不能加tween，一抗二抗了反而要加，去掉背景。马来酸干啥的不
: 知道，就知道抗菌是叠氮钠。
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E****A
发帖数: 184 | 24 封闭的时候应该不加tween20的吧，那是封闭之后加在maleic acid里当washing buffer
洗用的。
【在 s******y 的大作中提到】
: 你应该是记错了。tween20会干扰一些抗体的结合，在某些情况下会降低特异信号。
: 当然大部分情况下是无所谓的。
: 如果是用HRP, NaN3是绝对不可以用的。不过Licor就无所谓了。
: 我刚才查了一下google, Maleic acid 的确是抗菌剂，和背景没有太大关系。
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p******i
发帖数: 1092 | 25 我們有一個小滾子，可以趕走氣泡，也可以使液體分佈均勻
如果不滾一下，即使沒有氣泡，如果液體分佈不均勻，看起來是挺不准的
【在 s******y 的大作中提到】
: Oddysey 得缺点是背景太强。而且如果有灰尘什么的话就会出现一个大亮点。
: 有气泡的话更是了不得。
: 一般来说，我做完之后都必须把膜晾干了才能去定量，否则很不准。
: 不过好处就是给了我一个偷懒的借口。每天做完之后把膜往柜子里一放就好了，
: 第二天再去扫描。
:
: 算p
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I*****y
发帖数: 6402 | 26 我以前用的而抗都是1:50,000 dilution，也是Li Cor
【在 c*********r 的大作中提到】
: 要远红外荧光的http://www.licor.com/bio/products/reagents/irdye_secondary_antibodies/irdye_secondary_antibodies.jsp
: 其它公司也有相应的产品，一支二抗可以用很久，稀释度都在1：12000到1：15000左右
: 。。。
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I*****y
发帖数: 6402 | 27 这个说的有点扯了，可能是你没block好背景太强
【在 s******y 的大作中提到】
: Oddysey 得缺点是背景太强。而且如果有灰尘什么的话就会出现一个大亮点。
: 有气泡的话更是了不得。
: 一般来说，我做完之后都必须把膜晾干了才能去定量，否则很不准。
: 不过好处就是给了我一个偷懒的借口。每天做完之后把膜往柜子里一放就好了，
: 第二天再去扫描。
:
: 算p
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c*********r
发帖数: 1312 | 28 我们都是用milk来封闭，Wash和加抗体时都用了Tween 20。晕。。。上个片片吧，不知
道这个背景算高还是凑合。
【在 s******y 的大作中提到】
: tween20?
: Licor的技术人员特意的跟我们说过，不许在抗体溶液里加这个。
: 洗液里加这个倒是没有问题。
: 另外，我有点好奇的是maleic acid 到底是干什么用的？是抗菌剂么？
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s******y
发帖数: 28562 | 29 这个和block真的没有关系，不信下一次你故意在膜下弄点气泡看看
【在 I*****y 的大作中提到】
: 这个说的有点扯了，可能是你没block好背景太强
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s******y
发帖数: 28562 | 30 洗的时候肯定要用tween, 不然就洗不干净了。
但是加抗体的时候不应该加tween, 不然有些比较弱的抗体的结合会受到影响。
我不知道你们做的是什么蛋白，但是你们的红色的带怎么这么多啊？
要么就是你们用的一抗太差，要么就是非特异结合（背景信号的一种）了。
【在 c*********r 的大作中提到】
: 我们都是用milk来封闭，Wash和加抗体时都用了Tween 20。晕。。。上个片片吧，不知
: 道这个背景算高还是凑合。
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c*********r
发帖数: 1312 | 31 一抗有点差。。。
【在 s******y 的大作中提到】
: 洗的时候肯定要用tween, 不然就洗不干净了。
: 但是加抗体的时候不应该加tween, 不然有些比较弱的抗体的结合会受到影响。
: 我不知道你们做的是什么蛋白，但是你们的红色的带怎么这么多啊？
: 要么就是你们用的一抗太差，要么就是非特异结合（背景信号的一种）了。
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d****u
发帖数: 1553 | 32 你这个背景够高的，但是在我看来也很好解决啊。你的背景条带都是红色的，说明信号
是来自700um那个channel。你扫
描的时候把700um关掉就好了，还有一种办法是导出图像的时候直接打开那个800.tif的
文件就好了,缺点是图像是黑白的。
【在 c*********r 的大作中提到】
: 我们都是用milk来封闭，Wash和加抗体时都用了Tween 20。晕。。。上个片片吧，不知
: 道这个背景算高还是凑合。
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c*********r
发帖数: 1312 | 33 下次要试一下。^_^
【在 d****u 的大作中提到】
: 你这个背景够高的，但是在我看来也很好解决啊。你的背景条带都是红色的，说明信号
: 是来自700um那个channel。你扫
: 描的时候把700um关掉就好了，还有一种办法是导出图像的时候直接打开那个800.tif的
: 文件就好了,缺点是图像是黑白的。
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C********e
发帖数: 329 | 34 学习了，国内的国家重点实验室准备买这个仪器。价位是多少？和flurochem的性价比
那个更高，更适合在国内使用呢（国内环境没有美国这边干净，稍不注意，就长菌了，
马来酸或叠蛋钠可能都不行哟） |
d****u
发帖数: 1553 | 35 现在多少钱我不知道，不过我们那时候买的时候是40万RMB左右，不知道你在哪个城市，可能也不一样。blocking buffer
就一次性用吧，每次少用点。一抗加叠氮钠还是能用个半年左右的。这机器我印象里国内是基因公司独家代理。不知道你
是不是在上海，这帮兄弟每次上海及周边城市有人要买就带到我们实验室去让我给做介绍，也不知道给点提成的。
【在 C********e 的大作中提到】
: 学习了，国内的国家重点实验室准备买这个仪器。价位是多少？和flurochem的性价比
: 那个更高，更适合在国内使用呢（国内环境没有美国这边干净，稍不注意，就长菌了，
: 马来酸或叠蛋钠可能都不行哟）
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C********e
发帖数: 329 | 36 it sounds decent, possibly the price is lower than 400k RMB so far.
1st antibody can be used more than 6mos, really? thanks
市，可能也不一样。blocking buffer
国内是基因公司独家代理。不知道你
介绍，也不知道给点提成的。
【在 d****u 的大作中提到】
: 现在多少钱我不知道，不过我们那时候买的时候是40万RMB左右，不知道你在哪个城市，可能也不一样。blocking buffer
: 就一次性用吧，每次少用点。一抗加叠氮钠还是能用个半年左右的。这机器我印象里国内是基因公司独家代理。不知道你
: 是不是在上海，这帮兄弟每次上海及周边城市有人要买就带到我们实验室去让我给做介绍，也不知道给点提成的。
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C********e
发帖数: 329 | 37 it sounds decent, possibly the price is lower than 400k RMB so far.
1st antibody can be used more than 6mos, really? thanks
市，可能也不一样。blocking buffer
国内是基因公司独家代理。不知道你
介绍，也不知道给点提成的。
【在 d****u 的大作中提到】
: 现在多少钱我不知道，不过我们那时候买的时候是40万RMB左右，不知道你在哪个城市，可能也不一样。blocking buffer
: 就一次性用吧，每次少用点。一抗加叠氮钠还是能用个半年左右的。这机器我印象里国内是基因公司独家代理。不知道你
: 是不是在上海，这帮兄弟每次上海及周边城市有人要买就带到我们实验室去让我给做介绍，也不知道给点提成的。
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d****u
发帖数: 1553 | 38 国内很多实验室一抗都用很久，以前我还见过用一年的呢，都变味了，一样用。不过这
些多半时HA，FLAG之类的抗体。
如果你是内源抗体检测效率又不是那么高的话，还是先摸条件的比较好。
【在 C********e 的大作中提到】
: it sounds decent, possibly the price is lower than 400k RMB so far.
: 1st antibody can be used more than 6mos, really? thanks
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: 市，可能也不一样。blocking buffer
: 国内是基因公司独家代理。不知道你
: 介绍，也不知道给点提成的。
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