s******r
发帖数: 2876 | 1 Mouse tissue请问大家一般是先fix，还是先frozen？
一般组织在-80C冰箱能不能长期存放，固定之后冰冻，
能不能保质期长一点。
如果直接冰冻，那些有空腔的组织比如肠子，胃是不是
先得灌一些OCT。或者新鲜肠子能像福尔马林固定那样切开，再卷成卷后冰冻。
没固定的组织切片一般大家如何固定，固定好的片子能不能长期保存。
如果要染lacZ的话是不是冰冻之前不固定。
都是小白问题，请多指教。 |
M******s
发帖数: 138 | 2 Mouse tissue请问大家一般是先fix，还是先frozen？
看是什么目的用途，传统组织学用途先fix，其他用途例如dna,rna 或不适于fix的组织
学用途先freeze.
一般组织在-80C冰箱能不能长期存放，固定之后冰冻，能不能保质期长一点。
当然能长期放，固定或许保质期会长，但这不是重点，重点还是你的目的和组织的用途
，另外一点一定要注意，fix后的组织要冰冻保存，一定要经过tissue cryoprotection
,传统做法就是糖溶液浸泡。
如果直接冰冻，那些有空腔的组织比如肠子，胃是不是先得灌一些OCT。或者新鲜肠子
能像福尔马林固定那样切开，再卷成卷后冰冻。
都可以，其实因为要切成段再冻到oct里，不必纵向切开，也不必专门去灌，oct自然会
充盈到腔内。
没固定的组织切片一般大家如何固定，固定好的片子能不能长期保存。
关于切片的post-fix，现在用的基本有两类方法，1。 以4%PFA为主的配方，机理大致
是蛋白凝固，优点是固定效果好，缺点是会有交联。
2. 丙酮等有机溶剂浸泡，机理大致是蛋白凝固和脱水，优点组织形态好且无交联，缺
点不能室温长期保存，低温保存以后染色效果也不好。切片长期保存，无所谓固定不固
定，低温就行了。
如果要染lacZ的话是不是冰冻之前不固定。
最好不要，即使后固定也要控制时间和温度，因为长时间固定会降低lacZ活性，甚至失
活，那样敏感性就降低了，不好。 |
v***a
发帖数: 1242 | 3 赞
cryoprotection
【在 M******s 的大作中提到】
: Mouse tissue请问大家一般是先fix，还是先frozen？
: 看是什么目的用途，传统组织学用途先fix，其他用途例如dna,rna 或不适于fix的组织
: 学用途先freeze.
: 一般组织在-80C冰箱能不能长期存放，固定之后冰冻，能不能保质期长一点。
: 当然能长期放，固定或许保质期会长，但这不是重点，重点还是你的目的和组织的用途
: ，另外一点一定要注意，fix后的组织要冰冻保存，一定要经过tissue cryoprotection
: ,传统做法就是糖溶液浸泡。
: 如果直接冰冻，那些有空腔的组织比如肠子，胃是不是先得灌一些OCT。或者新鲜肠子
: 能像福尔马林固定那样切开，再卷成卷后冰冻。
: 都可以，其实因为要切成段再冻到oct里，不必纵向切开，也不必专门去灌，oct自然会
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l*****z
发帖数: 13617 | 4 赞专业！
cryoprotection
【在 M******s 的大作中提到】
: Mouse tissue请问大家一般是先fix，还是先frozen？
: 看是什么目的用途，传统组织学用途先fix，其他用途例如dna,rna 或不适于fix的组织
: 学用途先freeze.
: 一般组织在-80C冰箱能不能长期存放，固定之后冰冻，能不能保质期长一点。
: 当然能长期放，固定或许保质期会长，但这不是重点，重点还是你的目的和组织的用途
: ，另外一点一定要注意，fix后的组织要冰冻保存，一定要经过tissue cryoprotection
: ,传统做法就是糖溶液浸泡。
: 如果直接冰冻，那些有空腔的组织比如肠子，胃是不是先得灌一些OCT。或者新鲜肠子
: 能像福尔马林固定那样切开，再卷成卷后冰冻。
: 都可以，其实因为要切成段再冻到oct里，不必纵向切开，也不必专门去灌，oct自然会
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s******r
发帖数: 2876 | 5 太感谢了。
我就是收集tissue作染色。
如果我没有理解错的话，不固定的组织，就不用泡蔗糖溶液了吧。
要是泡蔗糖溶液，我看一般说是等组织沉到溶液里，这个一般大概会要多长时间。
还有一个肠子的问题，看到有人说肠组织很容易autolysis，我如果想看其中的lacZ的
话，
是不是不固定，不泡蔗糖，直接速冻也没有问题。
Mouse tissue请问大家一般是先fix，还是先frozen？
看是什么目的用途，传统组织学用途先fix，其他用途例如dna,rna 或不适于fix的组织
学用途先freeze.
一般组织在-80C冰箱能不能长期存放，固定之后冰冻，能不能保质期长一点。
当然能长期放，固定或许保质期会长，但这不是重点，重点还是你的目的和组织的用途
，另外一点一定要注意，fix后的组织要冰冻保存，一定要经过tissue cryoprotection
,传统做法就是糖溶液浸泡。
如果直接冰冻，那些有空腔的组织比如肠子，胃是不是先得灌一些OCT。或者新鲜肠子
能像福尔马林固定那样切开，再卷成卷后冰冻。
都可以，其实因为要切成段再冻到oct里，不必纵向切开，也不必专门去灌，oct自然会
充盈到腔内。
没固定的组织切片一般大家如何固定，固定好的片子能不能长期保存。
关于切片的post-fix，现在用的基本有两类方法，1。 以4%PFA为主的配方，机理大致
是蛋白凝固，优点是固定效果好，缺点是会有交联。
2. 丙酮等有机溶剂浸泡，机理大致是蛋白凝固和脱水，优点组织形态好且无交联，缺
点不能室温长期保存，低温保存以后染色效果也不好。切片长期保存，无所谓固定不固
定，低温就行了。
如果要染lacZ的话是不是冰冻之前不固定。
最好不要，即使后固定也要控制时间和温度，因为长时间固定会降低lacZ活性，甚至失
活，那样敏感性就降低了，不好。
【在 M******s 的大作中提到】
: Mouse tissue请问大家一般是先fix，还是先frozen？
: 看是什么目的用途，传统组织学用途先fix，其他用途例如dna,rna 或不适于fix的组织
: 学用途先freeze.
: 一般组织在-80C冰箱能不能长期存放，固定之后冰冻，能不能保质期长一点。
: 当然能长期放，固定或许保质期会长，但这不是重点，重点还是你的目的和组织的用途
: ，另外一点一定要注意，fix后的组织要冰冻保存，一定要经过tissue cryoprotection
: ,传统做法就是糖溶液浸泡。
: 如果直接冰冻，那些有空腔的组织比如肠子，胃是不是先得灌一些OCT。或者新鲜肠子
: 能像福尔马林固定那样切开，再卷成卷后冰冻。
: 都可以，其实因为要切成段再冻到oct里，不必纵向切开，也不必专门去灌，oct自然会
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l**i
发帖数: 8245 | 6 肠子这样的组织 能不能石蜡包埋切片 应该一样可以看到lacz
【在 s******r 的大作中提到】
: 太感谢了。
: 我就是收集tissue作染色。
: 如果我没有理解错的话，不固定的组织，就不用泡蔗糖溶液了吧。
: 要是泡蔗糖溶液，我看一般说是等组织沉到溶液里，这个一般大概会要多长时间。
: 还有一个肠子的问题，看到有人说肠组织很容易autolysis，我如果想看其中的lacZ的
: 话，
: 是不是不固定，不泡蔗糖，直接速冻也没有问题。
:
: Mouse tissue请问大家一般是先fix，还是先frozen？
: 看是什么目的用途，传统组织学用途先fix，其他用途例如dna,rna 或不适于fix的组织
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s******r
发帖数: 2876 | 7 石蜡应该不合适，有人说LacZ不能耐受有机溶剂。
肠子这样的组织 能不能石蜡包埋切片 应该一样可以看到lacz
【在 l**i 的大作中提到】
: 肠子这样的组织 能不能石蜡包埋切片 应该一样可以看到lacz
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l**i
发帖数: 8245 | 8 我用其它组织做过 没问题的
先x-gal染色，再固定包埋切片
【在 s******r 的大作中提到】
: 石蜡应该不合适，有人说LacZ不能耐受有机溶剂。
:
: 肠子这样的组织 能不能石蜡包埋切片 应该一样可以看到lacz
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s******r
发帖数: 2876 | 9 我明白你的意思，
我说的是染色切好的片子，不是先染再切。
我用其它组织做过 没问题的
先x-gal染色，再固定包埋切片
【在 l**i 的大作中提到】
: 我用其它组织做过 没问题的
: 先x-gal染色，再固定包埋切片
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l*****z
发帖数: 13617 | 10 我们一般先Lac-Z 染色，再石蜡包埋切片。。。
【在 l**i 的大作中提到】
: 肠子这样的组织 能不能石蜡包埋切片 应该一样可以看到lacz
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M******s
发帖数: 138 | 11 先染lacz再石蜡包埋再切，形态会非常好，缺点也很突出，就是已经处理过，就不能连
续切片做近似原位比较了，比如切十张sections第一lacz第二he第三ihc....这样第一
和最后相差不过0.1mm，基本可以认为是同一位置，形态也差不多，肉眼看是一样的。
所以如果多用途组织不适合先染lacz再石蜡包埋。
如果我没有理解错的话，不固定的组织，就不用泡蔗糖溶液了吧。
对，没有固定的组织绝对不能泡，会烂掉
要是泡蔗糖溶液，我看一般说是等组织沉到溶液里，这个一般大概会要多长时间。
固定后泡糖，实际上光沉底是不够的，尤其对于大块组织是这样，不过小组织24h,大组
织48h,中间换一到二次液体，基本就可以了
还有一个肠子的问题，看到有人说肠组织很容易autolysis，我如果想看其中的lacZ的
话，是不是不固定，不泡蔗糖，直接速冻也没有问题。
这个问题是因为酶含量高，对于低温保存组织是没有问题的，80度冰柜里基本没有活性
了，不用担心，切片时间短，切完冻起来也没事，但是要用以前从冰箱里拿出来就要尽
快做。 |
s******r
发帖数: 2876 | 12 谢谢，大包子奉上。
还有一个小疑问，切好的片子可以直接-80C保存吧，不用先室温Dry吧。
先染lacz再石蜡包埋再切，形态会非常好，缺点也很突出，就是已经处理过，就不能连
续切片做近似原位比较了，比如切十张sections第一lacz第二he第三ihc....这样第一
和最后相差不过0.1mm，基本可以认为是同一位置，形态也差不多，肉眼看是一样的。
所以如果多用途组织不适合先染lacz再石蜡包埋。
如果我没有理解错的话，不固定的组织，就不用泡蔗糖溶液了吧。
对，没有固定的组织绝对不能泡，会烂掉
要是泡蔗糖溶液，我看一般说是等组织沉到溶液里，这个一般大概会要多长时间。
固定后泡糖，实际上光沉底是不够的，尤其对于大块组织是这样，不过小组织24h,大组
织48h,中间换一到二次液体，基本就可以了
还有一个肠子的问题，看到有人说肠组织很容易autolysis，我如果想看其中的lacZ的
话，是不是不固定，不泡蔗糖，直接速冻也没有问题。
这个问题是因为酶含量高，对于低温保存组织是没有问题的，80度冰柜里基本没有活性
了，不用担心，切片时间短，切完冻起来也没事，但是要用以前从冰箱里拿出来就要尽
快做。
【在 M******s 的大作中提到】
: 先染lacz再石蜡包埋再切，形态会非常好，缺点也很突出，就是已经处理过，就不能连
: 续切片做近似原位比较了，比如切十张sections第一lacz第二he第三ihc....这样第一
: 和最后相差不过0.1mm，基本可以认为是同一位置，形态也差不多，肉眼看是一样的。
: 所以如果多用途组织不适合先染lacz再石蜡包埋。
: 如果我没有理解错的话，不固定的组织，就不用泡蔗糖溶液了吧。
: 对，没有固定的组织绝对不能泡，会烂掉
: 要是泡蔗糖溶液，我看一般说是等组织沉到溶液里，这个一般大概会要多长时间。
: 固定后泡糖，实际上光沉底是不够的，尤其对于大块组织是这样，不过小组织24h,大组
: 织48h,中间换一到二次液体，基本就可以了
: 还有一个肠子的问题，看到有人说肠组织很容易autolysis，我如果想看其中的lacZ的
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M******s
发帖数: 138 | 13 要室温 air dry, 1 到2h 就可以，否则可能会有冰晶，形态会破坏掉 |
M******s
发帖数: 138 | 14 我们用室温真空， 10分钟就好
普通air dry, 薄片30分，厚片1小时，振动机切片2小时，你这个半到一小时 |
A********0
发帖数: 3310 | 15 赞专业！赞耐心！大赞！
cryoprotection
【在 M******s 的大作中提到】
: Mouse tissue请问大家一般是先fix，还是先frozen？
: 看是什么目的用途，传统组织学用途先fix，其他用途例如dna,rna 或不适于fix的组织
: 学用途先freeze.
: 一般组织在-80C冰箱能不能长期存放，固定之后冰冻，能不能保质期长一点。
: 当然能长期放，固定或许保质期会长，但这不是重点，重点还是你的目的和组织的用途
: ，另外一点一定要注意，fix后的组织要冰冻保存，一定要经过tissue cryoprotection
: ,传统做法就是糖溶液浸泡。
: 如果直接冰冻，那些有空腔的组织比如肠子，胃是不是先得灌一些OCT。或者新鲜肠子
: 能像福尔马林固定那样切开，再卷成卷后冰冻。
: 都可以，其实因为要切成段再冻到oct里，不必纵向切开，也不必专门去灌，oct自然会
|
s******r
发帖数: 2876 | 16 再次感谢啊。
我们用室温真空， 10分钟就好
普通air dry, 薄片30分，厚片1小时，振动机切片2小时，你这个半到一小时
【在 M******s 的大作中提到】
: 我们用室温真空， 10分钟就好
: 普通air dry, 薄片30分，厚片1小时，振动机切片2小时，你这个半到一小时
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S******9
发帖数: 2837 | |
M**5
发帖数: 224 | |
