S******9
发帖数: 2837 | 1 大家D1打针以后成活率如何？打针后前3天死的不多，第一周和第2周反倒死的多，啥原
因？为何一周以后成活的小鼠size差别比较大？
谢谢 |
n***w
发帖数: 2405 | |
S******9
发帖数: 2837 | 3 交流一下？成鼠打针large和meddle size的血管deletion都不错，现在是脑部微血管要
d1.
【在 n***w 的大作中提到】
: 只用过一次pdgfrb cre...
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z****u
发帖数: 1007 | 4 PDGFRb-CreERT哇 ？
话说这耗子Jax没有。
我在用NG2-CreERT，想和PDGFRB-CreERT比较一下的说。 |
n***w
发帖数: 2405 | 5 我用的这个不是inducible的，是我们这里一个老师的，我当时正在（现在也在）选合
适的pericyte cre line，这个pdgfrb和rosa26 reporter line cross了，我看了一下
目的器官的cre表达。
这个老鼠original是从ralf adams那里过来的。
你的NG2好用吗？
我给你发站内信了。谢谢。
【在 z****u 的大作中提到】
: PDGFRb-CreERT哇 ？
: 话说这耗子Jax没有。
: 我在用NG2-CreERT，想和PDGFRB-CreERT比较一下的说。
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z****u
发帖数: 1007 | 6 我们以前是拿Wnt1-Cre. craniofacial的pericyte都是neural crest来的，所以被Wnt1
-Cre标记得很好. NG2-Cre我没有看过retina 的pericyte.但是至少在别的部位，标记
pericyte很好。 反正上个月开会，Philipe Soriano跟我说Ng2该是标记pericyte最好
的line了。今天NG2-CreERT刚到，才开始mating.
建议你换掉R26R reporter. LacZ 染色太麻烦了，强烈推荐ZsGreen reporter. 超级强
的荧光，PFA固定保存几个月都没问题。 |
S******9
发帖数: 2837 | 7 我们的PDGFb Cre是inducible的。 |
n***w
发帖数: 2405 | 8 我现在拿的ng2的line就应该是从soriano那里过来的，是他以前的一个post-doc（现在
是pi）给我们的。
ng2不是标记pericyte最好的，我从我自己的经验来看。
要研究pericyte，必须要多个marker确认。
而且commercial的NG2 （millipore）的，起码在adult retina里，标记得的不够好（
当然也可能是我技术问题）
我一会儿去看看zsgreen reporter.
你的ng2CreERT是从jackson买的吗？
http://jaxmice.jax.org/strain/008533.html
谢谢。
Wnt1
【在 z****u 的大作中提到】
: 我们以前是拿Wnt1-Cre. craniofacial的pericyte都是neural crest来的，所以被Wnt1
: -Cre标记得很好. NG2-Cre我没有看过retina 的pericyte.但是至少在别的部位，标记
: pericyte很好。 反正上个月开会，Philipe Soriano跟我说Ng2该是标记pericyte最好
: 的line了。今天NG2-CreERT刚到，才开始mating.
: 建议你换掉R26R reporter. LacZ 染色太麻烦了，强烈推荐ZsGreen reporter. 超级强
: 的荧光，PFA固定保存几个月都没问题。
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z****u
发帖数: 1007 | 9 Jeff Bush啊 我想标记效率肯定和部位有关。 在我检测的craniofacial region里面都
还不错。 不过确实应该拿多个line做比较，所以现在我们也在找别的line 包括PDGFrb
-Cre 还有Glast1-Cre
我们的NG2-Cre 以及CreERT都是Jax的。
ZsGreen是Allen Institue的Hongkui Zeng建立的，同时她还建立了另外很多个
reporter ，我用过的TdTomato, EYFP, ZsGreen都非常好。
Millipore的NG2 Ab我也在用，感觉不做antigen retrieval染的效果不太好。
【在 n***w 的大作中提到】
: 我现在拿的ng2的line就应该是从soriano那里过来的，是他以前的一个post-doc（现在
: 是pi）给我们的。
: ng2不是标记pericyte最好的，我从我自己的经验来看。
: 要研究pericyte，必须要多个marker确认。
: 而且commercial的NG2 （millipore）的，起码在adult retina里，标记得的不够好（
: 当然也可能是我技术问题）
: 我一会儿去看看zsgreen reporter.
: 你的ng2CreERT是从jackson买的吗？
: http://jaxmice.jax.org/strain/008533.html
: 谢谢。
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n***w
发帖数: 2405 | 10 谢谢。
我用过TdTomato的，不错。
retina做flatmount，要除掉vitreous，小鼠的vitreous还挺难弄的，这个也可能是我
染色不太好的原因。
因为retina里面，pericyte to endothelium ratio是所有器官里面最高的，比脑子里
都高。所以用retina来看pericyte，应该是不错。
PDGFrb
【在 z****u 的大作中提到】
: Jeff Bush啊 我想标记效率肯定和部位有关。 在我检测的craniofacial region里面都
: 还不错。 不过确实应该拿多个line做比较，所以现在我们也在找别的line 包括PDGFrb
: -Cre 还有Glast1-Cre
: 我们的NG2-Cre 以及CreERT都是Jax的。
: ZsGreen是Allen Institue的Hongkui Zeng建立的，同时她还建立了另外很多个
: reporter ，我用过的TdTomato, EYFP, ZsGreen都非常好。
: Millipore的NG2 Ab我也在用，感觉不做antigen retrieval染的效果不太好。
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b*****n
发帖数: 1841 | 11 搭车问几个问题：
有没有在几天大的小鼠打tamoxifen的？
有没有特异表达毒蛋白杀特异细胞的成功经验？
CreER表达很低（正常诱导<10%）有没有成功提高到50%以上的？
【在 S******9 的大作中提到】
: 大家D1打针以后成活率如何？打针后前3天死的不多，第一周和第2周反倒死的多，啥原
: 因？为何一周以后成活的小鼠size差别比较大？
: 谢谢
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z****u
发帖数: 1007 | 12 做过。不过这个真的是因鼠而异，因line而异。 新生的打药很容易死的，觉得好多其
实就是给针扎死的，所以我都拿滴管来喂。
几周前才做了一个DTA flox driven by Cre-ERT的诱导ablation实验，效果还是很明显
的。每天给4mg剂量的成鼠，一周后都死翘了。因为target的范围太广了。不过我所感
兴趣的组织里面大量的死亡组织能被看到。确实如预期。
【在 b*****n 的大作中提到】
: 搭车问几个问题：
: 有没有在几天大的小鼠打tamoxifen的？
: 有没有特异表达毒蛋白杀特异细胞的成功经验？
: CreER表达很低（正常诱导<10%）有没有成功提高到50%以上的？
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S******9
发帖数: 2837 | 13 zhaohu,
你灌胃过D1的鼠仔吗？效果如何？
生后3天IP就基本不会死了，但是脑皮质的血管要d1注射
【在 z****u 的大作中提到】
: 做过。不过这个真的是因鼠而异，因line而异。 新生的打药很容易死的，觉得好多其
: 实就是给针扎死的，所以我都拿滴管来喂。
: 几周前才做了一个DTA flox driven by Cre-ERT的诱导ablation实验，效果还是很明显
: 的。每天给4mg剂量的成鼠，一周后都死翘了。因为target的范围太广了。不过我所感
: 兴趣的组织里面大量的死亡组织能被看到。确实如预期。
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z****u
发帖数: 1007 | 14 D1喂过。拿10mg/ml的tam in corn oil 灌了20微升。 它喝下去了还是。第2天就看到
皮肤上reporter荧光了.目前小老鼠还在成长中，暂且不知道target tissue的表达效率
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S******9
发帖数: 2837 | |
