h*********e
发帖数: 55 | 1 我在实验室纯化蛋白时常先用His-,GST- tag纯化再切掉tag,但是发现在工业化蛋白纯
化中很少用tag。请问这是为什么？万分感谢。 |
d*****n
发帖数: 166 | 2 cost.
【在 h*********e 的大作中提到】
: 我在实验室纯化蛋白时常先用His-,GST- tag纯化再切掉tag,但是发现在工业化蛋白纯
: 化中很少用tag。请问这是为什么？万分感谢。
|
s******9
发帖数: 283 | |
e****s
发帖数: 1125 | |
o****u
发帖数: 214 | 5 特异性蛋白酶的价格太高。工业化蛋白生产如果要酶切处理，成本可以是蛋白发酵粗提
成本的几十倍甚至上百倍。所以，不是不得已一般不会用的。
【在 h*********e 的大作中提到】
: 我在实验室纯化蛋白时常先用His-,GST- tag纯化再切掉tag,但是发现在工业化蛋白纯
: 化中很少用tag。请问这是为什么？万分感谢。
|
b******n
发帖数: 4225 | 6 不知道工业化蛋白纯化怎么弄的
是不是盐析+离子交换柱？
感觉很多限制性内切酶的生产应该是用tag的吧
另外现在来自虾的碱性磷酸酶很少了，不少公司开发来自E. coli的重组蛋白
【在 h*********e 的大作中提到】
: 我在实验室纯化蛋白时常先用His-,GST- tag纯化再切掉tag,但是发现在工业化蛋白纯
: 化中很少用tag。请问这是为什么？万分感谢。
|
s******9
发帖数: 283 | 7 我问过NEB的人，如果要用histag，他们得付专利费。
【在 h*********e 的大作中提到】
: 我在实验室纯化蛋白时常先用His-,GST- tag纯化再切掉tag,但是发现在工业化蛋白纯
: 化中很少用tag。请问这是为什么？万分感谢。
|
s******9
发帖数: 283 | 8 NEB大部分的限制性内切酶都是recombinant的，一般不带tag。
提纯是通常就是离子交换，分子筛和疏水作用，要2-6步达到95%的纯度。
【在 b******n 的大作中提到】
: 不知道工业化蛋白纯化怎么弄的
: 是不是盐析+离子交换柱？
: 感觉很多限制性内切酶的生产应该是用tag的吧
: 另外现在来自虾的碱性磷酸酶很少了，不少公司开发来自E. coli的重组蛋白
|
m*b
发帖数: 1421 | 9 发明his tag的人岂不是要恨死他们了
这么好用的tag竟然为了省点儿小钱就不用了 |
b******n
发帖数: 4225 | 10 好像清华罗永章的那个抗肿瘤药恩度就是包含his tag的
不知道有没有付专利
【在 m*b 的大作中提到】
: 发明his tag的人岂不是要恨死他们了
: 这么好用的tag竟然为了省点儿小钱就不用了
|
A******y
发帖数: 2041 | 11 Protein A uses proprietary secretion tag, you don't even have to lyse the
cells. Just scoop up the media and do a quick clean up. A lot of industrial
protein is made this way. |
h*********e
发帖数: 55 | 12 谢谢各位的回复。
本人想自学这方面的知识，不知哪位能推荐一下这方面的经典书籍或文献？最好能有一
些实例。
万分感谢。 |
h*********e
发帖数: 55 | 13 his-tag和GST-tag的专利应该过期了吧。
【在 s******9 的大作中提到】
: 我问过NEB的人，如果要用histag，他们得付专利费。
|
m***c
发帖数: 177 | 14 Tag的作用是用来提纯。对于产量低、纯化困难的旦白是有效的。但是对于production
level来说，还要考虑单位产量的问题，除纯度外。有Tag的就需要増加纯化部骤，因此
就会增加纯化过程中的损耗。
【在 h*********e 的大作中提到】
: 我在实验室纯化蛋白时常先用His-,GST- tag纯化再切掉tag,但是发现在工业化蛋白纯
: 化中很少用tag。请问这是为什么？万分感谢。
|
