b*********8
发帖数: 44 | 1 我在烟草中做Co-IP， 用 A-HA 钓 B-GFP 。做了一次没有发现GFP信号。 我怀疑我的
蛋白的互做比较弱。请问cross-link如何做？
另外，如果把蛋白浓缩一下会不会效果好点？那个公司的浓缩柱会好点？
谢谢了！ |
j******n
发帖数: 941 | |
z********i
发帖数: 610 | |
m*******u
发帖数: 173 | 4 crosslink 是把抗体和beads cross link 吧， 保证IgG 不被洗脱下来。 你用的HA抗
体还是GFP抗体做的IP？ 我现在也在烟草里做 co-ip 可以站内联系 交流一下。 |
s*****a
发帖数: 59 | 5 The cheapest method to crosslink interacting proteins for Co-IP is to use
Formaldehyde as crosslinker. You need to find the lowest concentration of
formaldehyde in an initial test. I have been using 0.1% formaldehyde in PBS
to crosslink proteins on freshly harbested cells, room temperature for a few
minutes, and quench with 1.25M Glycine. Then lyse cells, sonicate and IP as
usual. I found this paper very useful: Optimization of Formaldehyde Cross-
Linking for Protein
Interaction Analysis of Non-Tagged Integrin β1 |
s*****a
发帖数: 59 | 6 This kit is to crosslink the antibody to the beads. I think LZ wants to
crosslink interacting proteins.
【在 j******n 的大作中提到】
: pierce direct IP kit
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b*********8
发帖数: 44 | 7 非常感谢大家的解答。
我是想cross-link烟草叶片，然后做co_IP。 因为用普通的方法没做出来，我怀疑我的
蛋白的互做比较弱。大家有什么好的解决办法吗？谢谢！ |
d******u
发帖数: 99 | 8 我也打算用cross link做烟草里的co IP，你有没试出一些方法来了。。。
用DSP？
【在 b*********8 的大作中提到】
: 非常感谢大家的解答。
: 我是想cross-link烟草叶片，然后做co_IP。 因为用普通的方法没做出来，我怀疑我的
: 蛋白的互做比较弱。大家有什么好的解决办法吗？谢谢！
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b*********8
发帖数: 44 | 9 还没试出来呢。有什么好方法，我们可以相互交流一下。
什么事DSP? |
