t******k
发帖数: 599 | 1 关于creERT2有一个问题想不通，如果不给tamoxifen，而只是转染一个flox-stop-flox
-gfp到细胞质里，那这个creert2可以起作用让gfp表达么？ |
F**i
发帖数: 43 | 2 我觉得会让GFP表达，我曾经电转creERT2和flox-stop-flox－GFP质粒，结果还没打
tamoxifen老鼠的细胞已经绿了。说明有leaky。
flox
【在 t******k 的大作中提到】
: 关于creERT2有一个问题想不通，如果不给tamoxifen，而只是转染一个flox-stop-flox
: -gfp到细胞质里，那这个creert2可以起作用让gfp表达么？
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D*a
发帖数: 6830 | 3 取决于你做的line了，有的leak，有的不leak |
t******k
发帖数: 599 | 4 thanks楼上二位。所以也就是说tamoxifen的作用不光是跟cre是否入核有关了？因为我
一直的理解是有tamoxifen结合cre就会入核所以反之没有tamoxifen cre还是会正常表
达却不会入核，但仍可以在胞质内作用于带有floxed的质粒。不过现在根据两位的回复
看来貌似tamoxifen的作用还要更加复杂？ |
z****u
发帖数: 1007 | 5 CreERT 总是多少有leakage的。依不同组织，不同stage, 甚至不同的flox allele都有
区别。
得仔细检验。 |
D*a
发帖数: 6830 | 6 生物体内的东西很难说呀，我也不知道机理...
一般都是筛好几个ES克隆然后打好几只老鼠然后挨个看看吧。
不知道现在都找公司做，还是不是这样了，还是图省事瞎弄。
【在 t******k 的大作中提到】
: thanks楼上二位。所以也就是说tamoxifen的作用不光是跟cre是否入核有关了？因为我
: 一直的理解是有tamoxifen结合cre就会入核所以反之没有tamoxifen cre还是会正常表
: 达却不会入核，但仍可以在胞质内作用于带有floxed的质粒。不过现在根据两位的回复
: 看来貌似tamoxifen的作用还要更加复杂？
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r********e
发帖数: 84 | 7 这种情况下CREERT2的表达量可能非常高，有leaky现象并不让人惊讶；另外，有些GFP
plasmid可能在细胞质中被creERT2 切掉了stop cassette。
【在 F**i 的大作中提到】
: 我觉得会让GFP表达，我曾经电转creERT2和flox-stop-flox－GFP质粒，结果还没打
: tamoxifen老鼠的细胞已经绿了。说明有leaky。
:
: flox
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t******k
发帖数: 599 | 8 主要是最近想做个体外实验，利用cre-flox来标记细胞。一个方法是把floxed的质粒转
到本身有promoter-creert2的细胞里，另外一个方法是把cre质粒转到本身带有floxed-
reporter的细胞里面去，再有就是把两种质粒一起转到wt细胞里。然后就想到这个有
promoter-creert2的细胞不加tamoxifen是不是也可以起作用了。
【在 D*a 的大作中提到】
: 生物体内的东西很难说呀，我也不知道机理...
: 一般都是筛好几个ES克隆然后打好几只老鼠然后挨个看看吧。
: 不知道现在都找公司做，还是不是这样了，还是图省事瞎弄。
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