v***a
发帖数: 1242 | 1 第二次做克隆。第一次做很顺，几乎没有什么问题就克隆好了。现在第二次，完全按照
第一次的方法来（不过是克隆另外一个gene），但是LB plate上就是不长一个colony。
只有一次例外。但偌大一个LB plate上就长了一个colony。PCR验证出来不对。很奇怪
的是，同时做的另一个plate里长了一堆像发霉似的白毛毛。
现在很心慌，不知道怎么曾经work的现在却不知道哪不work了。长白毛毛会是因为我做
transformation时候的SOC被contaminate了么？plate什么都是新做的。
谢谢！ |
b******n
发帖数: 4225 | 2 长霉菌了嘛，估计是倒平板的时候烧瓶口没烧彻底
至于基因无法克隆的原因可能是这个基因有二级结构或者产物对host strain有毒性
【在 v***a 的大作中提到】
: 第二次做克隆。第一次做很顺，几乎没有什么问题就克隆好了。现在第二次，完全按照
: 第一次的方法来（不过是克隆另外一个gene），但是LB plate上就是不长一个colony。
: 只有一次例外。但偌大一个LB plate上就长了一个colony。PCR验证出来不对。很奇怪
: 的是，同时做的另一个plate里长了一堆像发霉似的白毛毛。
: 现在很心慌，不知道怎么曾经work的现在却不知道哪不work了。长白毛毛会是因为我做
: transformation时候的SOC被contaminate了么？plate什么都是新做的。
: 谢谢！
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T**********t
发帖数: 1604 | 3 SOC是rich media，很容易污染。开启一瓶新的SOC之后，最好马上分装冻存，用的时候
需要多少拿多少，用不完的就扔，不要留着下次用。 |
b******n
发帖数: 4225 | 4 soc在hood里面取用就行了
基本上不会被污染
如果在hood外取用自然容易污染
【在 T**********t 的大作中提到】
: SOC是rich media，很容易污染。开启一瓶新的SOC之后，最好马上分装冻存，用的时候
: 需要多少拿多少，用不完的就扔，不要留着下次用。
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T**********t
发帖数: 1604 | 5 我实验室条件差，以前一直没有hood。现在有了，不过我也不常用。我以前连倒平板都
是敞着倒的，连个喷灯都没有。。。幸好一直没有什么污染问题，抗生素加得比较狠。
【在 b******n 的大作中提到】
: soc在hood里面取用就行了
: 基本上不会被污染
: 如果在hood外取用自然容易污染
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m**z
发帖数: 787 | 6 insertion not digested well?
【在 v***a 的大作中提到】
: 第二次做克隆。第一次做很顺，几乎没有什么问题就克隆好了。现在第二次，完全按照
: 第一次的方法来（不过是克隆另外一个gene），但是LB plate上就是不长一个colony。
: 只有一次例外。但偌大一个LB plate上就长了一个colony。PCR验证出来不对。很奇怪
: 的是，同时做的另一个plate里长了一堆像发霉似的白毛毛。
: 现在很心慌，不知道怎么曾经work的现在却不知道哪不work了。长白毛毛会是因为我做
: transformation时候的SOC被contaminate了么？plate什么都是新做的。
: 谢谢！
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v***a
发帖数: 1242 | 7 谢谢了！这是个好办法。
【在 T**********t 的大作中提到】
: SOC是rich media，很容易污染。开启一瓶新的SOC之后，最好马上分装冻存，用的时候
: 需要多少拿多少，用不完的就扔，不要留着下次用。
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v***a
发帖数: 1242 | 8 不知道呀。怎么样可以知道ligation等是否成功呢？我RE cut了以后跑胶然后切胶再提
取DNA再做transformation的。ligase几个月前用都是好的，现在应该也没问题吧？
【在 m**z 的大作中提到】
: insertion not digested well?
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m**z
发帖数: 787 | 9 if your transformation is fine, means your competent cell is still competent
, I would probably just start from the beginning... that's what I usually do
if one round of cloning failed...especially when both vector and insertion
are newly cut and haven't been used for ligation before.
【在 v***a 的大作中提到】
: 不知道呀。怎么样可以知道ligation等是否成功呢？我RE cut了以后跑胶然后切胶再提
: 取DNA再做transformation的。ligase几个月前用都是好的，现在应该也没问题吧？
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v***a
发帖数: 1242 | 10 谢谢了！明天再试一次用全新的SOC，如果不行就全部重来
competent
do
insertion
【在 m**z 的大作中提到】
: if your transformation is fine, means your competent cell is still competent
: , I would probably just start from the beginning... that's what I usually do
: if one round of cloning failed...especially when both vector and insertion
: are newly cut and haven't been used for ligation before.
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v***a
发帖数: 1242 | 11 多谢～
【在 b******n 的大作中提到】
: 长霉菌了嘛，估计是倒平板的时候烧瓶口没烧彻底
: 至于基因无法克隆的原因可能是这个基因有二级结构或者产物对host strain有毒性
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