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Biology版 - 用RNAseq比较转录组找基因,还有必要做qPCR吗?
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n****n
发帖数: 610
1
以前microarray时代是一定要做qPCR来确认up/down regulation.不知道在RNAseq的时
代还有没有必要做? 哪位高人有经验? 我在literature里面没看到这方面的信息。
t*d
发帖数: 1290
2
参考一下这个:
A major problem with validating RNA-Seq expression estimates is that there
is no clear 'gold standard' for expression estimation. Comparison of RNA-Seq
to microarrays has suggested that the former technology is more accurate
than the latter. We examined the recently published NanoString nCounter gene
expression system, but noticed many unexplainable outliers and high
variance between technical replicates (see Figure S4 of Additional file 1
and data in Additional file 2). Quantitative reverse transcription PCR (qRT-
PCR) has served as a benchmark in numerous studies but it is not a perfect
expression measurement assay, and it is therefore a priori unclear which
technology currently produces the most accurate expression estimates.
Nevertheless, at present we believe it to be the best measure of expression
aside from, perhaps, RNA-Seq itself. Due to the previously demonstrated
superiority of RNA-Seq over microarrays, and the problems with NanoString,
we performed all our benchmarking with respect to qRT-PCR.
PMID: 21410973

【在 n****n 的大作中提到】
: 以前microarray时代是一定要做qPCR来确认up/down regulation.不知道在RNAseq的时
: 代还有没有必要做? 哪位高人有经验? 我在literature里面没看到这方面的信息。

j******3
发帖数: 5244
3
唉,其实很多人没做也投了,文章也收了
有钱的老板砸钱灌水而已
S**********l
发帖数: 3835
4
我觉得那是必须的。我们刚做了一个,也就80%是真的。。。。

【在 n****n 的大作中提到】
: 以前microarray时代是一定要做qPCR来确认up/down regulation.不知道在RNAseq的时
: 代还有没有必要做? 哪位高人有经验? 我在literature里面没看到这方面的信息。

j****x
发帖数: 1704
5
参考这篇:
Griffith et al. Nature Methods. 2010 Oct;7(10):843-847
http://www.nature.com/nmeth/journal/v7/n10/full/nmeth.1503.html
C*****h
发帖数: 926
6
做了,更加增加数据的可靠性,可以发到更好的杂志。
数据越多越好。越有说服力。

【在 n****n 的大作中提到】
: 以前microarray时代是一定要做qPCR来确认up/down regulation.不知道在RNAseq的时
: 代还有没有必要做? 哪位高人有经验? 我在literature里面没看到这方面的信息。

M*****k
发帖数: 1556
7
我实验室没做,也发了。
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