w********a
发帖数: 324 | 1 请教大家一个问题：
做长段的colony PCR 用于检测阳性克隆，不要求高保真。PCR size 大于3 kb （在3-
6kb）。大家都用什么PCR酶检测啊？之前一直用NEB的 longAmp。效果不错，但是价格
太贵了。不知道有什么便宜点的替代产品。 谢谢！ |
l***y
发帖数: 638 | 2 我们做4-5kb的pcr都是用的最便宜的taq酶
【在 w********a 的大作中提到】
: 请教大家一个问题：
: 做长段的colony PCR 用于检测阳性克隆，不要求高保真。PCR size 大于3 kb （在3-
: 6kb）。大家都用什么PCR酶检测啊？之前一直用NEB的 longAmp。效果不错，但是价格
: 太贵了。不知道有什么便宜点的替代产品。 谢谢！
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g*****n
发帖数: 250 | 3 做colony PCR用 Taq就行了。好奇问一下，为什么非要PCR 3-6kb? 设计引物PCR短点的
不行吗？ |
w********a
发帖数: 324 | 4 我们做梭菌的，用Promega的Tag green，超过1kb就不行了。你们是在E。coli里面做吗
？ 你们用的是哪个公司的Taq呀？用PromegTaq green的话，在E. coli超过3kb的话我
们也经常做不出来
谢谢！
【在 l***y 的大作中提到】
: 我们做4-5kb的pcr都是用的最便宜的taq酶
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w********a
发帖数: 324 | 5 我们做梭菌的，用Promega的Tag green，超过1kb就不行了。你们是在E。coli里面做吗
？ 你们用的是哪个公司的Taq呀？用PromegTaq green的话，在E. coli超过3kb的话我
们也经常做不出来。。
有时候需要检测插入的片段，并且引物要保证在同源重组臂的外端。所以一般都长于
3kb
【在 g*****n 的大作中提到】
: 做colony PCR用 Taq就行了。好奇问一下，为什么非要PCR 3-6kb? 设计引物PCR短点的
: 不行吗？
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g*****n
发帖数: 250 | 6 插入片段内设计引物不就行了嘛。合成引物很快。何必在3kb上折腾。 |
w********a
发帖数: 324 | 7 是这么个理。但是3kb以上的PCR很多时候还是需要的。
请问你们的Taq是那个公司买的？你们在什么菌里面做colony PCR？谢谢！
【在 g*****n 的大作中提到】
: 插入片段内设计引物不就行了嘛。合成引物很快。何必在3kb上折腾。
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v********e
发帖数: 1597 | 8 life tech accuprime Taq
https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/12346086?gclid=
CMKFssnFk9ICFUlLDQodFIkJAg&ef_id=WJKjlgAABDxNDiag:20170216021351:s
6kb 无压力 |
w********a
发帖数: 324 | 9 你说的是colony PCR做6kb吧？ genomic DNA一般都没问题。但是colony PCR有时候就
比较难做。尤其是我们做格兰仕阳性菌的。。谢谢！
【在 v********e 的大作中提到】
: life tech accuprime Taq
: https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/12346086?gclid=
: CMKFssnFk9ICFUlLDQodFIkJAg&ef_id=WJKjlgAABDxNDiag:20170216021351:s
: 6kb 无压力
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l**l
发帖数: 338 | 10 Taq 里掺点pfu有奇效
【在 w********a 的大作中提到】
: 你说的是colony PCR做6kb吧？ genomic DNA一般都没问题。但是colony PCR有时候就
: 比较难做。尤其是我们做格兰仕阳性菌的。。谢谢！
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a*********n
发帖数: 390 | 11 真的？
【在 l**l 的大作中提到】
: Taq 里掺点pfu有奇效
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