h******y
发帖数: 351 | 1 How To Make Your Own ECL
ECL can be an expensive reagent in a lab, and what with it being involved in
the final stage of a western blot, it’s something you don’t want to have
to worry about too much. During my PhD, I was struggling with my western
blots for ages – it seemed I was doing everything right, I just wasn’t
getting any signal in the dark room. At the time I was using a pre-made ECL,
and a friend that I shared lab space with suggested I try her home-made
brew. I was sceptical at first, ... 阅读全帖 |
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h*******o
发帖数: 4884 | 2 用个两三次没什么问题
而且不管用什么stripping buffer， 用ECL的都要考虑把target 蛋白的位置错开，如
果不能错开的话还是分开做
尤其是ECL plus或者用pierce的dura/femto， 很容易就把膜烧坏了
而且最好rabbit 和 Mouse的抗体轮换做，这样interference 会小很多 |
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r*******n
发帖数: 563 | 3 最近准备跳槽，但是新公司HR说需要办个ECL，要30到60天。这个东西好办么？多大通过
几率？万一通不过原公司还能呆么？ |
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G******i
发帖数: 5226 | 4 ☆─────────────────────────────────────☆
ramanujan (自缢通向天堂) 于 (Mon May 17 21:09:38 2010, 美东) 提到:
最近准备跳槽，但是新公司HR说需要办个ECL，要30到60天。这个东西好办么？多大通过
几率？万一通不过原公司还能呆么？
☆─────────────────────────────────────☆
glemonxyy (小棉袄) 于 (Mon May 17 21:16:55 2010, 美东) 提到:
不太懂，楼主问的是EXPORT LICENSE么？
☆─────────────────────────────────────☆
ramanujan (自缢通向天堂) 于 (Mon May 17 21:26:23 2010, 美东) 提到:
是啊
半导体公司需要的那种
☆─────────────────────────────────────☆
Ginobili (潘帕斯雄鹰) 于 (Mon May 17 21:45:38 2010, 美东) 提到:... 阅读全帖 |
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b*******l
发帖数: 217 | 5 大家好。我们准备回国创立一家生物技术公司，做诊断试剂开发。现在寻找一位
electrochemiluminescence (ECL）领域的合作者，共同创业。有兴趣者请在这里回复
，或给发贴者回信，或发邮件到[email protected]
/* */。
谢谢！ |
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b*******l
发帖数: 217 | 6 大家好。我们准备回国创立一家生物技术公司，做诊断试剂开发。现在寻找一位
electrochemiluminescence (ECL）领域的合作者，共同创业。有兴趣者请在这里回复
，或给发贴者回信，或发邮件到[email protected]
/* */。
谢谢！ |
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b*******l
发帖数: 217 | 7 大家好。我们准备回国创立一家生物技术公司，做诊断试剂开发。现在寻找一位
electrochemiluminescence (ECL）领域的合作者，共同创业。有兴趣者请在这里回复
，或给发贴者回信，或发邮件到[email protected]
/* */。
谢谢！ |
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m******u
发帖数: 12400 | 8 今天怎么回事，突然要退出股版了？
发信人: capriccio (超级奶爸), 信区: Stock
标 题: Re: 靠，虎子推荐ecl出篓子了？
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Jul 31 18:58:42 2012, 美东)
估计小宝是APA的员工。 |
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M*******C
发帖数: 183 | 9 以前我们用ECF底物，strip用0.2N NaOH 就好了。
现在ECF 买不着了，改用ECL plus，Thermo Fisher/Pierce （32132）的，发现用NaOH
没法strip了，第一次blot的带仍然在那里。 看了ECLplus 的说明书，他们叫用
Thermo Scientific™Restore™ Western Blot Stripping Buffer (
Product No. 21059) 或者Restore Plus Western Blot Stripping Buffer (Product
No. 46430). ， 价格 500ml/$130, 太贵了，strip 一张膜得10ml 吧，500ml 50张膜。
不知道成分是什么，想自己配点，求各位指点！谢谢 |
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b******n
发帖数: 4225 | 10 1. 抗体的选择
对于国内的大多数实验室来讲，做western blot实验选择抗体是个头疼的问题。原因很
简单，买进口抗体捉襟见肘，买国产抗体得需要大无畏的勇气，对于我所在的兰州地区
的实验者而言，感触尤深。在 这五年的western blot实验历程里，我先后用过进口抗
体，进口抗体国内分装包装，国产抗体，质量良莠不齐。
进口抗体一般不会出现闪失：abcam品种全，质量过硬，但价高（3400元/100微升），
而且说是100微升，但至多能吸出来90微升；Sigma的 价最贵；比较有性价比的是CST的
抗体，现在好像是2200元/100微升，我前后用过二十几种， 1:1000的稀释比下，还没
有失过手，100微升通常能完成所有的免疫组化和western blot实验，还有一个优点是
通常量比100微升多出来10微升，唯一的不足是CST的品种实在不多。Santa的多克隆抗
体质量可以，但是选用 Santa的单抗还是有风险，估计这也是业界共识了吧。
进口抗体国内分装包装我也用过不少，呵呵，毕竟是穷人（420元/100微升），大概好
抗体的比例约为50%，如果能做出来，也存在一个问题，就是... 阅读全帖 |
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i****g
发帖数: 3896 | 11 写得比较有意思，但是不太实用，可能实验条件相差太大。precast gel比自己制的gel
效果要好很多，结果也容易重复。antibody要看运气的，呵呵。
1. 抗体的选择
对于国内的大多数实验室来讲，做western blot实验选择抗体是个头疼的问题。原因很
简单，买进口抗体捉襟见肘，买国产抗体得需要大无畏的勇气，对于我所在的兰州地区
的实验者而言，感触尤深。在 这五年的western blot实验历程里，我先后用过进口抗
体，进口抗体国内分装包装，国产抗体，质量良莠不齐。
进口抗体一般不会出现闪失：abcam品种全，质量过硬，但价高（3400元/100微升），
而且说是100微升，但至多能吸出来90微升；Sigma的 价最贵；比较有性价比的是CST的
抗体，现在好像是2200元/100微升，我前后用过二十几种， 1:1000的稀释比下，还没
有失过手，100微升通常能完成所有的免疫组化和western blot实验，还有一个优点是
通常量比100微升多出来10微升，唯一的不足是CST的品种实在不多。Santa的多克隆抗
体质量可以，但是选用 Santa的单抗还是有风险，估计这... 阅读全帖 |
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w********h
发帖数: 12367 | 12 【 以下文字转载自 Biology 讨论区 】
发信人: bulletin (bulletin), 信区: Biology
标 题: 穷人的劳斯莱斯——五年western经验谈（转）
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Mar 2 23:29:05 2012, 美东)
1. 抗体的选择
对于国内的大多数实验室来讲，做western blot实验选择抗体是个头疼的问题。原因很
简单，买进口抗体捉襟见肘，买国产抗体得需要大无畏的勇气，对于我所在的兰州地区
的实验者而言，感触尤深。在 这五年的western blot实验历程里，我先后用过进口抗
体，进口抗体国内分装包装，国产抗体，质量良莠不齐。
进口抗体一般不会出现闪失：abcam品种全，质量过硬，但价高（3400元/100微升），
而且说是100微升，但至多能吸出来90微升；Sigma的 价最贵；比较有性价比的是CST的
抗体，现在好像是2200元/100微升，我前后用过二十几种， 1:1000的稀释比下，还没
有失过手，100微升通常能完成所有的免疫组化和western blot实验，还有一个优点是
通常量比100微升多出来10... 阅读全帖 |
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s*****g
发帖数: 7857 | 13 以前做过植物蛋白提取.是要在提取液里(研钵中)反复研磨的.过滤,然后再...
另外,现在,普通ECL难以检测到的蛋白,可以用Millipore的
Immobilon Western Chemiluminescent Substrate
500mL Cat No. WBKLS0500
你可以买小包装.另外这个试剂背景较严重,(但对应相应分子量的Marker,你可以找到你
的相应蛋白带)他们最近出了消背景的试剂.我没有用过消背景的试剂.
通常我是把普同ECL和Millipore的Immobilon Western Chemiluminescent Substrate对
半混用或(普同ECL多些,而Immobilon Western Chemiluminescent Substrate少些)
往往普同ECL结果空白一片,洗洗膜,用普同ECL和Millipore的Immobilon Western
Chemiluminescent Substrate对半混用(或普同ECL多些,而Immobilon Western
Chemiluminescent Substrate少些),30秒看初步结果,然 |
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h********n
发帖数: 1671 | 14
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中国计算机事业回顾——毛泽东时代辉煌的微电子事业和计算机事业
一. 中国的计算机事业在毛泽东时代取得了巨大发展
中国电子计算机的科研、生产和应用是从上世纪五十年代中后期开始的。1956年，
周恩来总理亲自主持制定的《十二年科学技术发展规划》中，就把计算机列为发展科学
技术的重点之一，并筹建了中国第一个计算技术研究所。
我们知道，以逻辑电路器件作为标志，到目前为止的电子计算机可以分为四代（此
外还有“第五代”即人工智能计算机和“第六代”即生物计算机的说法，但至今尚未成
熟，本文不涉及）。每一代计算机，都比前一代更小、更快，技术工艺要求更高，价钱
也更便宜。中国科学家研制第一代到第四代计算机的工作，贯穿于整个毛泽东时代。
第一代计算机采用电子管。美国研制出第一代计算机用了4年（1943-1946，标志：
宾夕法尼亚大学莫尔学院的ENIAC），而中国通过学习苏联的技术，仅用3年就完成了（
1956-1958，标志：中科院计算所的103... 阅读全帖 |
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s*x
发帖数: 8041 | 15 特朗普对中国发动贸易战，在美国封杀中国华为，让芯片这个小小的产品成为中美战略
较量的焦点。
而在中国这则是两条经济发展道路的斗争。这两条发展道路的斗争现在已经转化成
中美经济的较量。
也许是由于已经觉察到美国贸易战的到来，2018年2月4日，也就是两个月前，官方
媒体《经济学家周报》发表了一篇文章：《中国计算机事业在毛泽东时代就已经取得巨
大发展，后来为什么嘎然而止？》，给年轻人讲述了一段鲜为人知的历史。
毛泽东时代不是一穷二白吃不饱饭吗？怎么还有计算机事业的“巨大发展”？
年轻人一脸茫然。
因此，文章的前面引用了马克思的一句话：“思想的闪电一旦彻底击中这块素朴的
人民园地，德国人就会解放成为人”。
这话已经讲得很明白，这篇文章就是“思想的闪电”，要解放被蒙蔽的人。这篇文
章开宗明义：
上世纪六七十年代，在西方资本主义国家发生了“第三次技术革命”或“信息技术
革命”，其影响持续至今。这一时期中国恰好又发生了文化大革命，于是有很多诬蔑毛
泽东时代的文章说：中国正处于内乱，耽误了宝贵的机遇。例如，在那本被吹捧为科技
史权威，由老自由化... 阅读全帖 |
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v***a
发帖数: 1242 | 16 做免疫共沉淀反应后跑胶，用的是ECL法曝光（用了enhanced ECL），首次曝光的结果
和预期的非常一致，条带的趋势都是先增后减（两个独立的实验）；后来我调整了
曝光时间，然后出来的就不是了，一个是一直减少；一个是不变再突然增加。
以前也遇到过一次类似的情况，也是做免疫共沉淀实验，也用了enhanced ECL，最初曝
光和等一会再曝光的结果正好相反。
大家碰到过这样的情况吗？该相信最早的曝光结果还是曝光多次后的结果？谢谢！ |
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g********0
发帖数: 6201 | 17 １。并不是你说每步操作（特别是转膜）没问题就没问题的，找个老手帮你看看。
２。不同组织目标蛋白含量不一样，对抗体的反应也不一样，对同样抗体，有些组织带
就很干净，有些就出杂band。
３。cell signaling似乎鼠源抗体效果强于兔源抗体。
４。在效果不好的情况下，就不要再用最便宜的那种２５０ml一大瓶的普通ECL发光液
了。卖贵一点的 ECL plus或ECL extra之类的增强液。 |
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s*****g
发帖数: 7857 | 18 WB可以用half regular ECL kit solution 加 Millpore 的强化ECL kit solution (
mixed)(背景太强,所以用些regular ECL kit solution ).
1st 胶片爆 30s,
然后4张胶片摞起来,爆10分钟...
最后挑最好的. |
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s******y
发帖数: 28562 | 19 他们号称是灵敏度和ECL-Plus/Femto 一个等级，但是在我们的实际经验中，
根本达不到那个等级。关键是因为Oddysey 对蛋白胶常用的蓝色染料敏感，
所以转完的膜总会有点背景荧光干扰，使得比较弱的带很难stand out.
我们的感觉是比ECL-Plus差一点点，但是比一般的ECL 好。
Oddysey 的好处是膜可以反复扫描，而且一般来说一次性就可以扫出线性的强度
不需要调节参数了。用胶片的坏处就是需要做好几张片子才能得出合适强度的照片。 |
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p*********w
发帖数: 23432 | 20 维基解密：美国外交文档部分中文翻译zz
from 政府丑闻 by Robert
原始来源：http://www.peacehall.com/news/gb/intl/2010/11/201011291554.shtml
G5在京召开，朝鲜半岛与关塔那摩成主要议题
09BEIJING1247
BEIJING-BASED G-5 CHIEFS OF MISSION ON DPRK, GTMO
2009-05-08 10:10
CONFIDENTIAL 保密等级：机密
Embassy Beijing
于五月八号在北京召开的G5大使常规会议上，法国大使Nicholas Chapuis报告说，
中国国务委员戴秉国告诉法国前总统希拉克，西方世界将在对朝鲜制裁的问题上一无所
获。据报道，戴秉国认为，涉及“（朝鲜）经济发展水平”的议题并无在六方会谈上扮
演何等重要角色，“美韩对话”才是解决问题的有效途径。德国大使Michael Schaefer
说，德国已经将美国要求其接受部分关押在关塔那摩基地的维吾尔人的信息告知中国，
但随后而来的是中国方面的不满和警告——如果德国接受关押人员，那“将对中德双边
关... 阅读全帖 |
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t*****g
发帖数: 6101 | 21 辉煌的毛泽东时代——中国计算机事业回顾
作者：tiexuetv
一. 中国的计算机事业在毛泽东时代取得了巨大发展
中国电子计算机的科研、生产和应用是从上世纪五十年代中后期开始的。
1956年，国家制定的《十二年科学技术发展规划》中，就把计算机列为发展科学技术的
重点之一，并筹建了中国第一个计算技术研究所。
我们知道，以逻辑电路器件作为标志，到目前为止的电子计算机可以分为四代。（此外
还有“第五代”即人工智能计算机和“第六代”即生物计算机的说法，但至今尚未成熟
，本文不涉及。）每一代计算机，都比前一代更小、更快，技术工艺要求更高，价钱也
更便宜。中国科学家研制从第一代到第四代计算机的工作，几乎贯穿于整个毛泽东时代
。
第一代计算机采用电子管。
美国研制出第一代计算机用了4年（1943-1946，标志：宾夕法尼亚大学莫尔学院的
ENIAC），而中国通过学习苏联的技术，仅用3年就完成了（1956-1958，标志：中科院
计算所的103机），并生产了50台左右。
第二代计算机采用晶体管。
美国从第一代计算机进入第二代计算机花了9年时间（1946-1954，标志：贝尔实验室的
TRADIC），中... 阅读全帖 |
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c******e
发帖数: 1581 | 22 你的分析很好，我学很多。我就挑个 typo 玩笑一下。你要早发在这儿，我可能会掺乎
两句，现在我再多说有点马后炮了。
关于 M&A, it is difficult to be accurate and exact.我最近也 miss 了一个。去
年 BP 漏油时，我立即进了搞水净化的 NLC。进一步分析他的 business model, 认为
他独立发展很难，但却是很好的被收购目标。前几个月清仓时，把这事忘了，也卖了。
没多久，ECL 就把他买了。我对 ECL 也很了解。对此懊悔不已。
我炒股时间是很长，但痛苦充满了记忆。 |
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d********a
发帖数: 3698 | 23 这不很正常么。
世界本来就是分工合作的。
国内发展这么快，
奇瑞不过是安徽地方政府搞得，搞得还不错。
最近GDI发动机都
.1对于高炉、焦化、烧结设备，我国自主设计制造能力较强，近年来出口数量较多
土耳其ISDEMIR公司4号高炉（内容积3050m3），由我国设计并提供关键设备，这是我国
出口最大容积高炉。
巴西盖尔道集团Acominas 2号高炉项目中：高炉（内容积1750m3）、烧结机（年产能
237万t）以及新焦炉（年产能63万t）主要设备从中国冶金科工集团公司和五矿公司成
套引进，现均已顺利投产。
土耳其Igdemix公司向中钢集团中国冶金设备总公司订购烧结机（年产能520万t）和两
座焦炉（年产能130万t）。
印度塔塔钢铁集团泰国有限公司决定在泰国建设1座450m3高炉，1台75m2烧结机及原料
场的1座5万m3煤气柜和1座1.2万kW高炉煤气发电站，由中冶华天公司总承包，工期18个
月。
首钢国际工程技术有限公司与马来西亚金狮集团签订焦化和烧结工程总承包合同，项目
包括4座55孔顶装焦炉（炭化室高6m）和265m2烧结机，拟将其钢产能由现有的350万t增
至500万t。
... 阅读全帖 |
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S*****s
发帖数: 287 | 24 如果你说的是膜和二抗的话价格和普通 HRP based western 差不多，不过它不需要显
色剂，Ladder 的用量也比普通的 Dual color ladder 少，综合下来花费还便宜一点。
这个系统最大的优势是可以把两个不同 species 的抗体放在一张膜上染色，如果抗体
选的适当，一张 Odyssey 膜等于是两张 ECL 膜的结果，试剂花费就少很多了。我上
个月跑了三十块胶，多个抗体同时染色然后用 Odyssey 看结果，得到的数据量起码等
于用 ECL 跑五十块胶。 |
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v***a
发帖数: 1242 | 25 我也有类似的co-ip不work的困扰。
请问你说的：
“Crosslink 1st antibody to beads and elute co-purified protein complex from
beads after washing (instead of boiling beads) to reduce background”
怎么个crosslink法？我是加了1st Ab overnight再加beads的。
还有elute我是用的SDS sample buffer，然后就boil，100 C，10min。boiling beads
和elute是两个独立的过程呀，为啥elute可以取代boiling？是我理解错你的意思了吗？
关于ECL plus，我觉得用ECL曝光久一点，貌似也跟plus一样的效果，而且plus还会令
blot颜色深浅不均一，不知道你会有这个问题吗？如果有，怎么解决比较好？
谢谢回答。
of |
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s******r
发帖数: 2876 | 26 同样的sample，同样的actin抗体，follow它的protocol，
ECL 1 min 有很清楚的带，Odyssey扫出来的看不见，加强intensity也只有很淡的条带，
大家有什么经验，Odyssey能达到普通ECL的灵敏度吗？ |
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s******r
发帖数: 2876 | 27 这个sample本身就比较稀，第一条lane已经是1:5稀释，后面是1:25, 1:125稀释。
所以western 本身的问题应该不大，主要是想看看在我手里ECL和Odyssey哪个好使，
可能二抗和blocking buffer都不够好，所以我这个看起来Odyssey比普通ECL要弱上
几倍。
actin，我的理解是表达极强的蛋白。基本可以看作是housekeeping，做loading
control。所以应该是极强，至少也是很强。在默认设置下，应该是强信号，甚至是过
饱和。这种背景还算低，但actin信号几乎没有的情况，说明western本身有问题。
如果其他步骤没有出差错的话，最大问题就是二抗-milk组合出了问题。
odyssey是不推荐使用奶粉的。就是因为它太灵敏，牛奶甚至普通bsa的背景太高。
因为很多公司这么做，所以我怀疑licor也可能会这样。licor一向推荐自己出的二抗和
blocking buffer。尤其是后者，比牛奶和bsa都贵很多，是他们公司主打消耗品之一。
他们非常不愿意见到客户用廉价的奶粉。别家出的二抗他管不了，但是自家的二抗，很
可能有什么技术，... 阅读全帖 |
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r*****m
发帖数: 231 | 28 我个人的经验是LICOR的灵敏度介于ECL pico和femto之间，很弱的signal用LICOR看很
吃力，因为背景还是太高了，不像ECL，只要操作得好背景应该为0。
不过我觉得LICOR最要命的是二抗的specificity问题，IP下来的sample用不同species
的二抗竟然能看到很强的IgG，这个让我直接怀疑用它同时做两个primary的
specificity可靠性。。。事实上我也确实遇到过一个channel的signal透到另一个
channel的情况，不过不知道是荧光的bleed through还是二抗的cross－reactivity？ |
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m*********e
发帖数: 378 | 29 ECL 就是enhanced chemiluminesence , lz用的是enhanced ECL? |
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A******y
发帖数: 2041 | 30 Wash and reblot with 2nd ab, some 2nd ab is not that stable. Are you also
using film or camera? Personally I beleive ECL should always use camera
because the linearity of ECL and film combo range is narrow. |
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b******r
发帖数: 111 | 31 Note: NHEs is membrane proteins that transmembrane 12 times. NHE5 is
localized to the plasma membrane;NHE6-9 reside on organellar membranes(
endosome,Golgi);
1. pcDNA transfects NHE5-9 through Fugene 6(ratio is 3 uL of Fugene/2 ug of
DNA) in 293 cells. After three days,collect cells.
2. Cold PBS washes cells. Add 150 uL of lysis buffer(final concentration:
50mM Tris pH7.4, 150mM NaCl, 1% triton, 0.1% sds, cocktail inhibitor)
into each well of 6-well plate. Scrape cells.
3. The lysate gets st... 阅读全帖 |
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m*********e
发帖数: 378 | 32 还想问一下 你是用什么显色的，ECL, ECL plus,还是pierce 的pico,duro什么的
in 5%MILK/PBST |
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s********n
发帖数: 248 | 33 ECL,take the ECL out when you are done with 2nd antibody, prewarm in room temp for about 25min, then use 4ml(buffer A)100ul(buffer B) for a 6*4cm^2 membrane, 4min, then develop. |
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r***n
发帖数: 52 | 34 做IP的negative control一般用isotype control,就是和IP的antibody一样的species,
right?现在我做的IP用的是cell signaling rabbit antibody (polyclonal),
negative control用的是santa cruz的 normal rabbit IgG, 这个有很多的reference
paper引用,看文章上都很干净。但是，我做的结果就是IgG control总有protein of
interest,量和IP的一样多， 这个蛋白是用mouse Ab检测的，MW是90，所以不可能是重
链。奇怪的是，当我检测IP的那个protein (cell signaling),根据说明要4度过夜，结
果发现上次检测的IgG control的目的蛋白量减少了，但不是完全没有，因为我这两个
蛋白都是用ECL检测的，就是说上次检测蛋白的信号还在。但是我又用anti-mouse的二
抗做ECL，IgG control和IP的量又是一样。
这是怎么回事？
还有，有谁知道 cell signaling的Ab用多少... 阅读全帖 |
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r***n
发帖数: 52 | 35 做IP的negative control一般用isotype control,就是和IP的antibody一样的species,
right?现在我做的IP用的是cell signaling rabbit antibody (polyclonal),
negative control用的是santa cruz的 normal rabbit IgG, 这个有很多的reference
paper引用,看文章上都很干净。但是，我做的结果就是IgG control总有protein of
interest,量和IP的一样多， 这个蛋白是用mouse Ab检测的，MW是90，所以不可能是重
链。奇怪的是，当我检测IP的那个protein (cell signaling),根据说明要4度过夜，结
果发现上次检测的IgG control的目的蛋白量减少了，但不是完全没有，因为我这两个
蛋白都是用ECL检测的，就是说上次检测蛋白的信号还在。但是我又用anti-mouse的二
抗做ECL，IgG control和IP的量又是一样。
这是怎么回事？
还有，有谁知道 cell signaling的Ab用多少... 阅读全帖 |
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s***i
发帖数: 160 | 36 多谢两位的指教
下周根据意见改进
我通常是用普通ECL显示 然后再把半个小时还没有显示的膜再用supersignal显示一遍
不过通常普通ECL显示不出来 super也没辙
上面的PDK就是这样的例子 |
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A******y
发帖数: 2041 | 37 Almost all the modern western blot imaging system is better than films (
assuming you are using femto level substrate), I like the top of the line
alpha-innotech imager (do not get the red or blue one they try to sell; they
are horrible in my opinion). Bio-rad imager is very common but I think
their tech is the oldest. GE one is very nice. Do not get Kodak one if it
is still on the market (horrible).
Bio-rad recently join the ECL reagent market, their femto-ECL (Clarity) is a
lot cheaper than... 阅读全帖 |
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A******y
发帖数: 2041 | 38 Almost all the modern western blot imaging system is better than films (
assuming you are using femto level substrate), I like the top of the line
alpha-innotech imager (do not get the red or blue one they try to sell; they
are horrible in my opinion). Bio-rad imager is very common but I think
their tech is the oldest. GE one is very nice. Do not get Kodak one if it
is still on the market (horrible).
Bio-rad recently join the ECL reagent market, their femto-ECL (Clarity) is a
lot cheaper than... 阅读全帖 |
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s*****g
发帖数: 7857 | 39 要不
1。固定，打孔，直接免疫荧光染色，照相？（你会需要一个cytospin的机器把悬浮细
胞离心到玻片上）
2。或 IP-Western
3。 或针对此蛋白做细胞的免疫荧光染色， 再做Flow cytometry
4。灵敏的 ECL 液体也是关键。反正GE 的ECL不行。 我平时都是用GE的加少量
MILLIPORE的。MILLIPORE的太强了，有杂带，还需要更好的分子量marker. （GE的我们
是专门用
来显GAPDH，ACTIN等常规大量蛋白的） |
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M*******C
发帖数: 183 | 40 不知道在大家手上work的怎么样？买过好几种抗体。
在我手里，trouble很多啊，要么一堆杂带，没有特异带；要么背景很脏很黑，也看不
到特异带；要么带是白色的，并且结果也不是想要的。而类似的问题，我handle其他公
司的，失败率没这么高。测同一个蛋白，abcam的很好用，clean，结果正确。cell sig
的乱七八糟。trouble呢，公司都宣称在他们手里好用。
他们的western protocol是这样的，很不一般，大家觉得合理吗
Block： 5% Milk TBST （他们说不能用BSA)
一抗： 5% BSA TBST 稀释
二抗： 5% Milk TBST
平时我们要么是block/一抗都BSA. 要么是牛奶block， 一抗直接在TBST. 二抗从来只
是TBST. work的抗体总是work了。
而cell sig 的， 有的抗体，即使完全按照他们的说法，甚至他们寄来 positive ctrl
， 也不work， 而他们的positive ctrl， 我用 abcam的抗体轻易检测出。 abcam 的
问题是现在卖的太贵。而cell sig的花了钱不w... 阅读全帖 |
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i****e
发帖数: 170 | 41 3. 看看short channel model吧， Vdsat=(vgs-vth)*EcL/(Vgs-Vth+EcL).以.13工艺为
例, Ec=10^5，L=120nm，Vgs-Vth~200mV的话，Vdsat=150mV, if Vgs>Vth and Vds>
Vdsat, then the nmost is in saturation.
2,1 期待牛人回答。
1.感觉有时候是不是为了low power? |
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p****y
发帖数: 23737 | 42 2006年3月26日，新语丝发表了司履生的举报信，举报魏于全院士论文造假。（全文见
：http://bbs.ebiotrade.com/showtopic-12290.aspx ）方舟子在登出这封举报信时，加了按语，表示认为司履生举报成立，魏于全的论文确实造假。按语全文如下：
【方舟子按：司履生教授信中提到的给Nature Medicine的评述我在2003年已收到，后
来根据司教授的意见，没有公布。我很高兴司教授现在愿意公布此事。我认为司教授对
魏于全院士论文有假的指控是成立的。中国科学院应该认真调查此事，给公众一个交代
。如果调查结果认定魏于全院士发表的Nature Medicine论文的确有假，不管他该负的
责任有多大，鉴于魏于全能够在2003年当选院士是因为假成果，那么中国科学院至少应
该免去其院士称号。】
三天后，也就是2006年3月29日，魏于全院士向“新语丝”网站发去实名回复，回复中
附有其2003年答复杂志编辑部疑问的原文。该文表示，“司先生很多问题的提法本身是
不准确的，甚至还是错误的”。（该文未查到原文，仅有相关新闻描述）
2006年3月31日，方舟子本人在新语丝发... 阅读全帖 |
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s********o
发帖数: 3783 | 43 共识不是我说的。。。
既然你也懂得baidu了半天从犄角旮旯里抽出一点点能支持你的证据
那你不如baidu一下 “闽南话 古汉语”
看看前100篇的内容是啥。。
不过我估计你不敢贴，那我贴给你看吧
把百度设为主页 百度一下，找到相关网页约142,000篇，用时0.052秒
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E部落 —— 闽南话：保留古汉语最多的强势方言
24个回复 - 发帖时间: 2008年1月31日
* 主题：【闲聊杂谈】闽南话：保留古汉语最多的强势方言 [阅读：530 次，回贴...
闽南话形成于唐代，是东南部最早的汉语方言之一。形成最早的方言——吴语，由于...
www.ecl.com.cn/Forum/PostShow.asp?id=3671695 2010-7-30 - 百度快照
闽南话：古汉语的活化石□陈亚南
1977 年八九月间，美国先后发射了两颗“ |
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w****2
发帖数: 12072 | 44 还好意思说计算机。邓对中国计算机科技打击最大（或之一），完全断掉了中国的超大
规模集成电路的研究（由于惯性毛时代的政策有一些延续，以１９８３年为界），＂造
不如买＂。
在大规模集成电路制造方面，截止到1983年，16K MOS动态存储器研制成功；8位机用大
规模集成电路品种基本配套；4K MOS静态存储器进入小批量生产；高性能4位处理机集
成电路批量生产；电子器件工业总公司研制成功6800八位微处理器（仿制美国Motorola
公司 1974年推出的6800）；甘肃天光电工厂生产出64位、256位、1024位双极型ECL存
储器；上海无线电十四厂生产出CMOS大规模集成电路（1981年）等等。另外，超大规模
集成电路的关键设备研制工作也取得一定进展，不少基础材料基本达到生产要求。
以1983年的“银河I”巨型计算机为例，这项工程耗费1亿
元人民币，由于片面追求国际先进速度，忽视了国内相关部门的协调、促进和合作，硬
件大量从国外购买，没有使我国的整体技术取得任何实质性的进步（的确是犯了“造船
不如买船”病）。而此时国内一些具有实力的集成电路科研和生产单位，由于得不到足
够的经费进行技术开... 阅读全帖 |
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h******k
发帖数: 13418 | 45 10月13号的南方周末发表了一篇如丧考妣的为乔布斯的死而惋惜的文章里，说了这样的
几段话：对乔布斯万众顶礼膜拜的中国，也是盛行复制创意和技术的中国；在北京等大
城市，人们被莫名的忧伤笼罩；“文革”中动员式发展让中国的计算机沦为没有任何应
用价值的拼凑品，还有著名高校研制出“只会加法不会减法”的计算机的笑话。
看了这段话，我认为南方周末很无耻，他们自己顶礼膜拜、奴才一样的崇拜美国资本
家，却认为，“中国万众顶礼膜拜乔布斯”，认为“中国人莫名的忧伤”。请问南方周
末，什么时候你们代表了中国人？你们不经过别人同意就代表了？
尤其无耻的是，南方周末借着给自己美国老板哭丧的机会污蔑文革，给自己支持的极
右改革遮丑。请问南方周末，“著名高校研制出只会加法不会减法的计算机”这事情是
真的吗？你们的证据呢？这事情是改革还是文革时代发生的？如果是改革时代发生的问
题，那不正好证明你们支持的新自由主义改制是错的？当然南方周末可以狡辩说，那计
算机制造出的样机，曾经有一段时间没成功，出毛病了，没有减法。如果是这样，那美
国研制飞机时候坠毁了，我能不能说美国搞了半天研制出专门坠毁的飞机？
请问... 阅读全帖 |
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a**********y
发帖数: 2367 | 46 this is because both Real Madrid and Barcelona lost in ECL |
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M*****8
发帖数: 17722 | 47 2013年7月9日最新的1688个看跌的股票。
多数到顶。墙街已深入插管，吸血在即。
排列依次为，号码，股票符号，收市价。
#0001, A , 44.6000
#0002, AA , 7.9010
#0003, AAGIY , 17.1600
#0004, AAMRQ , 4.7300
#0005, AAN , 28.9700
#0006, AAON , 24.7400
#0007, AAP , 83.2000
#0008, AAUKY , 9.5300
#0009, ABAX , 50.2800
#0010, ABCP , 1.0000
#0011, ABT , 34.7400
#0012, ACAT , 51.5000
#0013, ACE , 92.3800
#0014, ACGL , 52.3700
#0015, ACH , ... 阅读全帖 |
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M*****8
发帖数: 17722 | 48 2013年7月9日最新的1688个看跌的股票。
多数到顶。墙街已深入插管，吸血在即。
排列依次为，号码，股票符号，收市价。
#0001, A , 44.6000
#0002, AA , 7.9010
#0003, AAGIY , 17.1600
#0004, AAMRQ , 4.7300
#0005, AAN , 28.9700
#0006, AAON , 24.7400
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#0009, ABAX , 50.2800
#0010, ABCP , 1.0000
#0011, ABT , 34.7400
#0012, ACAT , 51.5000
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#0015, ACH , ... 阅读全帖 |
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O*******d
发帖数: 20343 | 49 Radiation-hardening techniques[edit]
Physical:
Hardened chips are often manufactured on insulating substrates instead of
the usual semiconductor wafers. Silicon dioxide (SOI) and sapphire (SOS) are
commonly used. While normal commercial-grade chips can withstand between 50
and 100 gray (5 and 10 krad), space-grade SOI and SOS chips can survive
doses many orders of magnitude greater. At one time many 4000 series chips
were available in radiation-hardened versions (RadHard).[3]
Bipolar integrated ... 阅读全帖 |
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g***j
发帖数: 40861 | 50 【 以下文字转载自 WaterWorld 讨论区 】
发信人: zfax (xafz), 信区: WaterWorld
标 题: 不要错过今晚罕见的血月食 （Rare 'Blood Moon' Lunar Eclipse
发信站: BBS 未名空间站 (Mon Apr 14 14:43:55 2014, 美东)
今天晚上有月食，还是血红色的。
今晚不看，下次就是2032年乐。。。
不想整晚不睡的可以三点起来看到4点。
Don't Miss Rare 'Blood Moon' Lunar Eclipse Tonight
http://abcnews.go.com/Technology/miss-rare-blood-moon-lunar-ecl
urn your gaze to the stars tonight for an eerie and spectacular view of the
“blood moon.” At 12:53 a.m. ET, the Earth will begin to position itself
between the sun and the m... 阅读全帖 |
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