s******s
发帖数: 13035 | 1 打算用biotinylated的RNA probe做一些检测蛋白、核酸相互作用的实验， 加热revers
e crosslink以后
需要用beads把这些RNA probe和直接相互作用的核酸除掉，但是不想碰那些pull-down下
来的蛋白和其他核酸。
Anyway, 简单说，就是用什么浓度的什么detergent可以解决掉蛋白/蛋白和蛋白/核酸的
interaction,
但是不影响核酸/核酸以及biotin/avidin的interaction？ |
T**********t
发帖数: 1604 | 2 很难啊，Avidin也是蛋白，影响到其他蛋白的detergent一样会影响avidin的。
不过说实话，没太看懂你要做什么，我今天会开多了，理解力严重受影响。 |
w******e
发帖数: 1187 | 3 你rephrase一下你的目的？觉得可能用competitor更好些
revers
down下
酸的
【在 s******s 的大作中提到】
: 打算用biotinylated的RNA probe做一些检测蛋白、核酸相互作用的实验， 加热revers
: e crosslink以后
: 需要用beads把这些RNA probe和直接相互作用的核酸除掉，但是不想碰那些pull-down下
: 来的蛋白和其他核酸。
: Anyway, 简单说，就是用什么浓度的什么detergent可以解决掉蛋白/蛋白和蛋白/核酸的
: interaction,
: 但是不影响核酸/核酸以及biotin/avidin的interaction？
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T**********t
发帖数: 1604 | 4 也可以用高盐buffer梯度洗脱一下看看。
【在 w******e 的大作中提到】
: 你rephrase一下你的目的？觉得可能用competitor更好些
:
: revers
: down下
: 酸的
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s******y
发帖数: 28562 | 5 You can try high salt like 2M tris.
revers
down下
酸的
【在 s******s 的大作中提到】
: 打算用biotinylated的RNA probe做一些检测蛋白、核酸相互作用的实验， 加热revers
: e crosslink以后
: 需要用beads把这些RNA probe和直接相互作用的核酸除掉，但是不想碰那些pull-down下
: 来的蛋白和其他核酸。
: Anyway, 简单说，就是用什么浓度的什么detergent可以解决掉蛋白/蛋白和蛋白/核酸的
: interaction,
: 但是不影响核酸/核酸以及biotin/avidin的interaction？
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h****n
发帖数: 2552 | |
T**********t
发帖数: 1604 | 7 为什么要用2M Tris啊？我一般好像都是用0.1M Tris+2M NaCl或者类似的buffer，0.1M
的Tris缓冲能力已经很好了，用Tris来提高离子强度是不是有点太浪费了。
【在 s******y 的大作中提到】
: You can try high salt like 2M tris.
:
: revers
: down下
: 酸的
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s******y
发帖数: 28562 | 8 NO, I mean using 2M tris to disrupt the binding of protein but not the
binding of DNA or biotin-avadin
1M
【在 T**********t 的大作中提到】
: 为什么要用2M Tris啊？我一般好像都是用0.1M Tris+2M NaCl或者类似的buffer，0.1M
: 的Tris缓冲能力已经很好了，用Tris来提高离子强度是不是有点太浪费了。
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C*******e
发帖数: 4348 | 9 biotin-avadin的相互作用不是很强么？应该有不少这方面的研究比如离子浓度多高仍
然不会破坏 biotin-avadin相互作用什么的
DNA-DNA 相互作用方面的文献资料也很多啊 |
a******8
发帖数: 231 | 10 1M Nacl in binding buffer. |
T**********t
发帖数: 1604 | 11 我知道啊，我就是不知道为什么用2M Tris而不是2M NaCl。
【在 s******y 的大作中提到】
: NO, I mean using 2M tris to disrupt the binding of protein but not the
: binding of DNA or biotin-avadin
:
: 1M
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